تصوير الكالسيوم في المختبر في مزارع الحصين قصيرة وطويلة المدى للفئران

خذ ثقافة عصبية الحصين قصيرة المدى للفئران تمثل الخلايا العصبية الشابة وثقافة طويلة المدى تمثل الخلايا العصبية المسنة.

تظهر الخلايا العصبية القديمة كثافة أعلى من قنوات الكالسيوم ذات الجهد المضغوط من النوع L ، أو L-VGCCs ، والتي تظل مفتوحة لفترة أطول عند إزالة الاستقطاب الغشائي

احتضن بمؤشر الكالسيوم الفلوري الذي ينتشر في الخلايا ، ثم اغسله لإزالة أي صبغة زائدة.

ضع الثقافات في غرفة التروية تحت المجهر الفلوري.

أدخل محلولا يحتوي على ناقلات عصبية ترتبط بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى تدفق أيونات الصوديوم ويؤدي إلى إزالة الاستقطاب الغشائية.

تعمل

إزالة الاستقطاب على تنشيط L-VGCCs ، مما يتيح تدفق الكالسيوم إلى السيتوبلازم.

في الثقافة طويلة المدى ، تؤدي الكثافة العالية والفتح المطول ل L-VGCCs إلى زيادة الكالسيوم ، وهي سمة مميزة لشيخوخة الخلايا العصبية.

يولد ارتباط الكالسيوم بالمؤشر التألق ، حيث تظهر الخلايا العصبية القديمة كثافة مضان أعلى ، مما يعكس زيادة مستويات الكالسيوم داخل الخلايا عند التحفيز.

في هذا الإجراء ، احتضان الخلايا باستخدام Fura2-AM لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام ، ثم انقل الغطاء إلى غرفة التروية. بعد ذلك ، ضع غرفة التروية مع الغطاء في الحامل على المجهر المقلوب. حدد المجال المجهري وقم ببث الخلايا باستمرار باستخدام HBS الدافئ مسبقا.

بعد ذلك ، قم بإ