موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:14 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بأقسام الدماغ من نموذج الفأر التنكسي العصبي.
احتضن بمحلول حجب مكمل بالمنظفات لزيادة نفاذية الأنسجة ومنع الارتباط غير المحدد. تجاهل الحل.
إدخال الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف لويحات الأميلويد بيتا. احتضن بالتحريض للأجسام المضادة للتفاعل مع لويحات الأميلويد بيتا ، ثم اغسلها.
أضف الأجسام المضادة الثانوية الحمراء الموسومة بالفلوروفور واحتضنها في الظلام للسماح للأجسام المضادة بالتفاعل.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة ، متبوعا بغسل الكحول.
أضف الكركمين ، الذي يربط الأميلويد الغني بألواح بيتا بتقارب عال ، ثم اغسله.
بعد ذلك ، عالج بزيادة تركيزات الكحول ، وتجفيف أقسام الدماغ. أضف الزيلين لإزالة أي آثار للكواشف.
قم بتركيب قسم على شريحة وراقب تحت المجهر الفلوري.
استخدم ليزر بطول موجي 590 نانومتر لإثارة الفلوروفورات الحمراء على الأجسام المضادة الثانوية. التقط الصورة.
قم بالتبديل إلى ليزر بطول موجي 480 نانومتر لإثارة الكركمين ، مما ينبعث منه مضان أخضر.
تراكب الصور ؛ يؤكد التموضع الفلوري الأحمر والأخضر لويحات الأميلويد بيتا في أنسجة المخ.
لوضع العلامات على العينات المقطعة بالتبريد بأجسام مضادة لبيتا المضادة A ، اغسل العينات ثلاث مرات باستخدام PBS طازج لكل غسلة في آبار فردية من صفيحة مكونة من 12 بئرا قبل منع أي ارتباط غير محدد بمصل الماعز العادي بنسبة 10٪ في PBS و 0.5٪ Triton x-100 ل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية