تصور ثلاثي الأبعاد لعدوى فيروس داء في أنسجة دماغ الفئران

خذ قسما سميكا ثابتا من فأر مصاب بفيروس داء.

يصيب الفيروس الخلايا العصبية ويتكاثر ، مما ينتج عنه بروتينات فيروسية موجودة داخل الخلايا.

عالج بمنظف لاختراق الأغشية الخلوية ومحلول مانع لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.

احتضان الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف البروتينات الفيروسية ، تليها الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.

عالج بصبغة ملزمة بالحمض النووي الفلوري لتسمية النواة.

قم بتجفيف الأنسجة في زيادة تركيزات الكحول ، ثم ضع محلول مقاصة لزيادة شفافية الأنسجة للتصوير.

قم بتركيب القسم في غرفة التصوير ، واملأه بمحلول المقاصة ، وأغلقه.

باستخدام الفحص المجهري للمسح الضوئي بالليزر متحد البؤر ، قم بتصوير الأنسجة بشكل منفصل باستخدام ملصقات الفلورسنت ، ثم دمجها لإنشاء صورة ثنائية الأبعاد.

احصل على صور في مستويات بؤرية مختلفة عبر الأنسجة ودمجها لإنشاء تمثيل ثلاثي الأبعاد لتقييم تطور العدوى.

للتلوين المناعي لأقسام أنسجة المخ ، اغسل العينات مرتين لمدة ساعة واحدة في 4 ملليلتر من 0.2٪ Triton X-100 في PBS ، متبوعا بالنفاذية لمدة يومين عند 37 درجة مئوية ، في 4 ملليلتر من 0.2٪ Triton X-100 ، 20٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، و 0.3 مولي جلايسين في PBS. منع أي ارتباط غير محدد ب 4 ملليلتر من 0.2٪ Triton X-100 و 10٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد و 6٪ مصل طبيعي في PBS لمدة يومين عند