موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:34 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بالأقسام العرضية الثابتة مسبقا للأقسام القشرية للدماغ المسطحة. يغسل لإزالة آثار التثبيت.
قم بتلطيخ الأقسام بمحلول ديامينوبنزيدين أو DAB وكبريتات النيكل والأمونيوم.
ينتشر DAB في الخلايا العصبية القشرية ويتفاعل مع السيتوكروم أوكسيديز في الميتوكوندريا ، مكونا راسب داكن. تعمل كبريتات النيكل والأمونيوم على تغميق الراسب ، مما يعزز التباين.
أضف بارافورمالدهيد لإيقاف تفاعل التلوين، ثم اشطفه.
قم بتركيب الأقسام على شريحة وقم بتجفيفها بغسول الإيثانول.
اشطفها بالأيزوبروبانول والزيلين لتنظيف القسم وتحسين انتقال الضوء.
ضع وسيطا متصاعدا وضع غطاء عليه.
عند تصويرها تحت مجهر المجال الساطع ، داخل الخلايا العصبية القشرية ، تمتص الرواسب الضوء وتشتته ، مما يجعلها تبدو مظلمة.
في المقابل ، تنقل المناطق غير الملوثة التي تم تطهيرها الضوء وتظهر مشرقة.
يسلط هذا التباين الضوء على الوحدات القشرية كهياكل مظلمة غير مكتملة على خلفية أفتح ، تمثل مجموعات عصبية نشطة تشارك في معالجة المعلومات الحسية.
اغسل الأنسجة المقطعية في محلول HEPES لمدة 15 دقيقة بتحريض لطيف. أثناء الغسيل ، قم بإعداد محلول تلطيخ السيتوكروم أوكسيديز الطازج ، وأضف مكون DAB قبل استخدامه مباشرة. الآن ، احتضان الأقسام في محلول التلوين الطازج في درجة حرارة الغرفة باستخدام شاكر. وراقب. اعتمادا على مقدار التثبيت ، يمكن ملاحظة التلوين في غضون 10 دقائق ، أ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية