تحليل الخلايا المناعية في الأنسجة العصبية للفأر باستخدام قياس التدفق الخلوي

خذ الخلايا المعزولة من الأعصاب الوركي للفأر والعقد الجذرية الظهرية أو DRGs.

احتضن بالأجسام المضادة الموسومة بالفلوروفور ضد CD45 و CD11b ، ومع الأجسام المضادة الموسومة بالبيوتين ضد معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية ، لتسمية الخلايا المناعية.

احتضان الستربتافيدين الموسوم بالفلوروفور الذي يرتبط بالبيوتين.

عالج بمثبت لتحقيق الاستقرار في البنية الخلوية.

أدخل عازلة نفاذية مع صبغة الحمض النووي الفلورية لاختراق الأغشية وتسمية النوى.

باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، قم بتمرير الخلايا عبر شعاع الليزر لتقييم الخصائص البصرية والفلورية.

قم بإزالة الركام ذات التألق الأعلى للحمض النووي لعزل الخلايا المفردة واكتشاف التألق من العلامات.

تحديد الخلايا التي تعبر عن CD45 ، وهي علامة مميزة للخلايا المناعية ، وتأكيد وجودها.

تعبر معظم الخلايا الإيجابية CD45 في DRG عن CD11b و MHC من الفئة الثانية ، مما يشير إلى خلايا شبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة ، وهي غائبة في الأعصاب الوركي.

تكمل هذه التقنية التصوير لتحليل عدم تجانس الخلايا المناعية داخل الأنسجة العصبية.

في الكمبيوتر ، حدد القنوات المناسبة للكشف عن الفلوروفورات ذات الأهمية ، ومعدل التدفق المناسب للعينات ، والعدد الإجمالي للأحداث التي سيتم جمعها لكل عينة. يجب أن يكون الحد الأدنى لعدد الأحداث 1 مليون.

بعد ذلك ، قم بإنشاء مخططات مبعثرة تحت ورقة عمل عالمية