موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • May 29th, 2025
خذ إدخالا غشائيا يحتوي على شرائح دماغية عضوية من النمط العضوي الجنيني للفأر ، حيث تعبر الخلايا العصبية والخلايا الدبقية الكعبرية عن بروتينات الفلورسنت ، مما يتيح تصورها.
باستخدام الفحص المجهري الفلوري ، حدد شريحة بها خلايا عصبية قشرية فلورية تهاجر شعاعيا نحو سطح الشريحة باستخدام سقالات دبقية شعاعية سليمة.
انقل ملحق الغشاء مع الشريحة المحددة إلى طبق ذو قاع زجاجي مع وسائط لدعم النشاط الخلوي أثناء التصوير.
ضع الطبق في غرفة المجهر متحد البؤر المقلوب التي يتم التحكم فيها بالمناخ لضمان بقاء الخلية.
اضبط معلمات التصوير لالتقاط صور واضحة مع تقليل التلف الضوئي.
بعد ذلك، قم بتكوين مكدس Z في المنطقة المستهدفة لتصور الهياكل الخلوية.
بدء التصوير بفاصل زمني على فترات منتظمة.
قم بتحليل الصور لتقييم الهجرة الشعاعية للخلايا العصبية القشرية من المنطقة تحت البطينية باتجاه الصفيحة القشرية على طول السقالات الدبقية الشعاعية ، مع تسليط الضوء على أنماط الهجرة العصبية.
حدد شريحة دماغية للتصوير من خلال عرض الشرائح من خلال مجهر مقلوب. اختر شريحة بها خلايا عصبية مفردة ساطعة في SVZ العلوي ، وتهاجر شعاعيا نحو سطح الشريحة
يشير وجود عمليات الفلورسنت الدقيقة للخلايا الدبقية الشعاعية التي تمتد على الصفيحة القشرية بأكملها إلى وجود سقالة دبقية شعاعية سليمة ، والتي تستخدم عن طريق الخلايا العصبية القشرية المهاجرة.
انقل ملحق الغشاء بشريحة مختارة إلى طبق زجاجي سفلي بقطر 50 ملم يحتوي على 2 مل من وسط زراعة الشرائح. ضع الطبق في غرفة المناخ في المجهر متحد البؤر.
اضبط الدقة على 512 × 512 بكسل. قم بزيادة سرعة المسح الضوئي من 400 هرتز إلى 700 هرتز لزيادة معدل الإطارات من حوالي 1.4 إلى حوالي 2.5 إطار في الثانية. لا تستخدم أكثر من مرتين في المتوسط.
حدد مكدس Z من خلال المنطقة المثقبة بالكهرباء بحجم خطوة يبلغ 1.5 ميكرون. ابدأ سلسلة الفاصل الزمني بأخذ مكدس Z كل 30 دقيقة. تسمح الإعدادات الموصوفة بدقة وسطوع كافيين للصورة مع الحفاظ على تلف الضوء منخفضا أثناء الاستحواذ.