موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:19 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بقسم أنسجة دماغ الفأر الذي يحتوي على منطقة الاهتمام في مخزن مؤقت للحفاظ على الترطيب أثناء التصوير.
يتم الحصول على الأنسجة من نموذج فأر مرض الزهايمر المحقون بالميثوكسي X04 ، وهي صبغة فلورية.
يرتبط Methoxy X04 على وجه التحديد بهياكل الألواح ذات الثنيات β في لويحات الأميلويد ويحتفظ بتألقها للتصوير والتحليل.
باستخدام مجهر فلوري مع مرشح للأشعة فوق البنفسجية ، قم بإثارة الميثوكسي-X04 والتقط التألق المنبعث لتصور لويحات الأميلويد المسماة بالفلورسنت على الأنسجة المحيطة.
بدون ضبط مرحلة المجهر ، التقط صورا لنفس المنطقة في وضع المجال الساطع لتفصيل بنية الأنسجة ووضع التألق لتصور اللويحات.
قم بمحاذاة الصور ذات المجال الساطع والفلورسنت باستخدام برنامج معالجة الصور لتعيين اللويحات بدقة على الهياكل التشريحية.
توفر هذه الصور تصورا مفصلا لويحات الأميلويد في سياقها الهيكلي لدراسة أمراض مرض الزهايمر.
بمساعدة أطلس دماغ الفأر التجسيمي ، حدد أقسام الدماغ التي تحتوي على منطقة الاهتمام ، وضع كل قسم في مادة التجميد في بئر من لوحة ثقافة مكونة من 24 بئرا. بعد ذلك ، استخدم ماصة يمكن التخلص منها لإضافة قطرة من PBS على شريحة مجهرية ثم ضع القسم على القطرة.
افحص القسم تحت المجهر الفلوري لتحديد المناطق التي تحتوي على لويحات A-beta المسماة بالميثوكسي-X04. بدون تحريك مرحلة المجهر ، التقط صورا للمناطق ذات الأهمية في المجال الساطع وكذلك في وضع التألق. يجب أن تظهر كل صورة نفس المنطقة في كلا المجالين لربط اللويحة بالمنطقة الهيكلية لقسم الأنسجة.
احفظ الصور الملتقطة وتسميتها وفقا لرقم. أيضا ، سجل رقم البئر في اللوحة وحقل الصور الملتقطة. ضع القسم مرة أخرى في البئر المخصص بمجرد اكتمال التصوير. افحص القسم التالي في التسلسل باستخدام نفس الإجراء لتجنب تجفيف الأقسام.
لمحاذاة الصور، افتح الحقل الساطع وصور مجال الأشعة فوق البنفسجية لنفس عائد الاستثمار في الصورة J. بعد ذلك ، استخدم البرنامج المساعد J للفسيفساء لمحاذاة حواف الصورتين. احفظ الصورة المحاذاة والمدمجة وفقا لرقم البئر في مجلد ، مع رقم معين. اجمع بين الصور من أقسام مختلفة من نفس لتحديد وتوطين اللويحات في المنطقة ذات الاهتمام.