التصوير المصغر المحسن بالتباين بالتصوير المقطعي المحوسب لآفات التشوه الكهفي الدماغي في دماغ الفأر

خذ دماغ جرو فأر ثابت كيميائيا مع تشوهات كهفية دماغية أو CCMs - مجموعات من الأوعية الدموية غير الطبيعية المليئة بالدم الراكد.

اعزل الدماغ الخلفي ، واشطفه بمحلول عازل ، واحتضانه في محلول تلطيخ قائم على اليود.

يخترق اليود الأوعية الدموية القابلة للاختراق في مناطق CCM ، ويرتبط بمكونات الدم ، ويعزز تباين الآفات.

جفف الأنسجة بالهواء لإزالة محلول التلوين الزائد.

ضع الأنسجة في أنبوب وأغلقها لمنع انكماش الأنسجة.

قم بتأمين الأنبوب داخل أنبوب أكبر باستخدام الإسفنج وقم بتثبيته عموديا في حامل التصوير المقطعي المحوسب الدقيق.

ابدأ الفحص.

ينبعث مصدر الأشعة السينية من أشعة سينية مركزة تمر عبر الأنسجة.

تمتص المناطق الملطخة باليود الأشعة السينية أكثر من الأنسجة المحيطة.

يسجل الكاشف الأشعة السينية المرسلة ، ويولد صورا حيث تظهر CCMs أكثر إشراقا.

يقوم النظام بتدوير الأنسجة ، والتقاط صور ثنائية الأبعاد من زوايا متعددة.

تعيد البرامج المتخصصة بناء هذه الصور في نموذج ثلاثي الأبعاد ، وتكشف عن مواقع CCM في الدماغ.

ابدأ في تحضير العينة عن طريق ملء حقنة سعة 10 ملليلتر مزودة بإبرة قياس 29 مع ثلاثة ملليلتر من 2٪ بارافورمالدهايد في PBS. ثم قم بإجراء التروية داخل القلب على جرو P8 القتل الرحيم ، عن طريق إدخال الإبرة في بطين قلب الفأر ، وحقن الحجم الكامل للبارافورمالدهايد ببطء.

بعد استخدام المقص لفصل الرأس ، قم بإزالة الجلد من الرأس وتقشير الجمجمة ، باستخدام ملقط لتشريح الدماغ بالكامل إلى 4٪ بارافورمالدهيد في PBS. بعد إصلاح الدماغ بين عشية وضحاها عند 4 درجات مئوية. في اليوم التالي ، افصل الدماغ الخلفي باستخدام الملقط واشطفه بمحلول PBS.

بعد ذلك ، احتضن الأدمغة الخلفية في محلول اليود من Lugol لمدة 48 ساعة. بعد الحضانة ، جفف الأدمغة الخلفية بالهواء لفترة وجيزة لإزالة محلول اليود الزائد من Lugol. بعد ذلك ، قم بتعبئة الأدمغة الخلفية الملطخة باليود في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 0.65 ميكرولتر ، وأغلقها تماما بغشاء البارافين البلاستيكي لتجنب انكماش الأنسجة. ضع أنابيب أجهزة الطرد المركزي الدقيقة في أنابيب بلاستيكية سعة خمسة ملليلتر مع إسفنج لمنعها من التحرك أثناء الفحص.

قم بتركيب الأنبوب الذي يحتوي على الدماغ الخلفي رأسيا على حامل الألومنيوم في نظام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق. قم بتعيين معلمات المسح. استخدم 540 إسقاطا في وقت تعريض ضوئي مدته ثانيتان ، مع ظروف مصدر تبلغ 50 كيلو فولت و 10 واط للحصول على مجموعات البيانات المقطعية. تقوم الصور الشعاعية من الماسح الضوئي بإعادة بنائه تلقائيا بواسطة برنامج إعادة بناء الإسقاط القائم على الأجهزة الذي يوفره نظام التصوير المقطعي المحوسب الصغير ، مما ينتج عنه سلسلة صور من الشرائح المحورية 16 بت.