موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:16 دقيقة • May 29th, 2025
خذ مزرعة الخلايا السليفة قليلة التغصن (OPCs) ، المعزولة من دماغ جرو الفئران ، والتي تم حثها على التمايز إلى الخلايا قليلة التغصن. تم إصلاح الخلايا للحفاظ على الهندسة الخلوية.
تعبر الخلايا قليلة التغصن المتمايزة عن بروتين المايلين الأساسي ، أو MBP ، وهي علامة على الخلايا قليلة التغصن الناضجة ، في حين أن كل من OPCs والخلايا المتمايزة تعبر عن عامل نسخ الخلايا قليلة التغصن 2 ، أو Olig2.
ضع محلولا حاجب النفاذية واحتضانه بالتحريض ، ونفاذية الأغشية الخلوية ومنع مواقع الربط غير المحددة.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف العلامات واحتضانها بالتحريض للسماح بالارتباط.
اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة ، ثم أضف أجساما مضادة ثانوية مختلفة مترافقة بالفلوروفور خاصة بالأجسام المضادة الأولية واحتضانها بالتحريض.
اغسل الخلايا ثم ضعها في نظام تصوير مزدوج مضانة.
استخدم ضوءا ذا أطوال موجية محددة لإثارة الفلوروفورات المميزة واكتشاف الإشارات المنبعثة لتصور العلامات.
تحديد الخلايا قليلة التغصن المتمايزة التي تعبر عن olig2 و MBP بين OPCs غير المتمايزة التي تعبر فقط olig2.
أحضر الطبق إلى درجة حرارة الغرفة. استنشق الآبار ، وأضف 250 ميكرولتر من DPBS تحتوي على 5٪ NGS و 0.1٪ Triton X-100. احتضن اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة مع اهتزاز مداري لطيف. تحضير محلول الحضانة الأولي عن طريق تخفيف الجسم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية