لماذا تهم نسبة كثافة الفلورسنت لـ AMPA/NMDA في التحقق من صحة الهدف؟

تُستخدم نسبة شدة الفلورة لـ AMPA/NMDA كعلامة على اللدونة التشابكية وعمليات التعلم والذاكرة، مما يوفر قراءة كمية لتقييم تأثيرات المركبات على إشارات الغلوتامات في اللوزة الدماغية.

كيف يدعم عزل إشارات مستقبلات AMPA وNMDA مسار عملية الاكتشاف؟

يتيح التصوير المرئي المستقل لفلورة مستقبلات AMPA وNMDA القياس الدقيق لتوازن تعبير هذه المستقبلات، وهو أمر بالغ الأهمية لتقييم آلية عمل المركبات التي تعدل النقل المشبكي.

ما هي قياسات المتغيرات التابعة الكمية التي تتيح فحص المركبات؟

تسمح قياسات شدة الفلورة شبه الكمية لمستقبلات AMPA وNMDA في مناطق محددة من مناطق الاهتمام بإجراء مقارنة موضوعية للتغيرات في تعبير المستقبلات عبر الظروف التجريبية.

لماذا تهم متطلبات التكرار في التعاون متعدد الوظائف؟

يضمن التكرار توليد بيانات متسقة وموثوقة عبر المختبرات والفرق المختلفة، وهو أمر أساسي لبناء الثقة في نتائج التحقق من الهدف وتمكين الحصول على نتائج ما قبل سريرية قابلة للتكرار.

ما هي قدرات التحليل الإحصائي المطلوبة قبل تنفيذ هذه الطريقة؟

تتطلب هذه الطريقة قدرات لقياس شدة الفلورة، وحساب النسب، وإجراء مقارنات إحصائية بين المجموعات لتقييم التغيرات الجوهرية في تعبير المستقبلات المرتبطة بمؤشرات التعلم والذاكرة.

قياس تعبير البروتين في دماغ القوارض باستخدام التألق بالأشعة تحت الحمراء القريبة والمسح عالي الدقة

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأعصاب

0 مشاهدات • 3:03 د • May 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خذ شريحة زجاجية تحتوي على أقسام أنسجة دماغ الفئران ملطخة بالمناعة لمستقبلات AMPA و NMDA في الخلايا العصبية اللوزة.

تتوسط مستقبلات AMPA تدفق الصوديوم الناجم عن الغلوتامات والانتقال المشبكي الضداجي السريع.

في المقابل ، تتوسط مستقبلات NMDA الغلوتامات وتدفق الصوديوم والكالسيوم الناجم عن ناهض مشترك ، مما يسهل الانتقال المشبكي المثير البطيء.

يتم

تلطيخ المستقبلات بالأجسام المضادة الأولية ويتم اكتشافها باستخدام الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور بالأشعة تحت الحمراء القريبة.

ضع جانب الأنسجة المنزلقة لأسفل على واجهة المسح الضوئي القريبة من الأشعة تحت الحمراء.

اضبط معلمات التصوير وابدأ التصوير.

عند إضاءة الليزر ، تنبعث الفلوروفورات الموجودة على مستقبلات AMPA و NMDA من الفلورة.

يقلل

التصوير بالأشعة تحت الحمراء القريبة من التألق الذاتي ، مما يعزز وضوح الإشارة.

يضمن المسح عالي الدقة أيضا تمايزا واضحا لإشارات التألق ، مما يتيح التصور الدقيق لمستقبلات AMPA و NMDA القريبة في اللوزة.

باستخدام برنامج التصوير ، احسب نسبة شدة التألق AMPA / NMDA في منطقة معينة ذات أهمية كعلامة على التعلم والذاكرة.

ضع الشرائح على واجهة المسح الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة بحيث يكون النسيج متجها لأسفل. صور شرائح متعددة في وقت واحد باستخدام أداة تحديد. قم بتصوير الشرائح باستخدام أعلى إعداد جودة ، بدقة 21 ميكرومتر. في إزاحة 0 نانومتر ، قم باستيراد الصور إلى برنامج تحليل الصور لعرضها ووضع علامة عليها لتحليل البروتين شبه الكمي.

بعد فتح برنامج تحليل الصور ، حدد منطقة العمل التي تم مسح الصورة ضوئيا فيها. بعد ذلك ، افتح الصورة الممسوحة ضوئيا في برنامج تحليل الصور لعرض المسح الضوئي ، واضبط الأطوال الموجية والتباين والسطوع والتكبير المعروض دون تغيير الصورة الأولية أو إجمالي الانبعاثات الكمية.

بعد تحديد المناطق الرئيسية للقياس الكمي ، حدد علامة التبويب تحليل على طول الجزء العلوي من الصفحة ، ثم حدد رسم مستطيل لرسم مستطيل فوق المنطقة التي سيتم تحديدها كميا. لعرض حجم المستطيل، حدد الأشكال على طول الجزء السفلي الأيسر من الشاشة. ثم حدد الأعمدة على طول أسفل اليمين. ثم أضف عمودي الارتفاع والعرض لتحديد حجم الشكل. أخيرا ، قم بتسمية الشكل وكرر. بمجرد أخذ عينات من جميع المناطق، تابع دمج البيانات المتوفرة وتحليلها من علامة التبويب الأعمدة.