قياس تعبير البروتين في دماغ القوارض باستخدام التألق بالأشعة تحت الحمراء القريبة والمسح عالي الدقة

خذ شريحة زجاجية تحتوي على أقسام أنسجة دماغ الفئران ملطخة بالمناعة لمستقبلات AMPA و NMDA في الخلايا العصبية اللوزة.

تتوسط مستقبلات AMPA تدفق الصوديوم الناجم عن الغلوتامات والانتقال المشبكي الضداجي السريع.

في المقابل ، تتوسط مستقبلات NMDA الغلوتامات وتدفق الصوديوم والكالسيوم الناجم عن ناهض مشترك ، مما يسهل الانتقال المشبكي المثير البطيء.

تلطيخ المستقبلات بالأجسام المضادة الأولية ويتم اكتشافها باستخدام الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور بالأشعة تحت الحمراء القريبة.

ضع جانب الأنسجة المنزلقة لأسفل على واجهة المسح الضوئي القريبة من الأشعة تحت الحمراء.

اضبط معلمات التصوير وابدأ التصوير.

عند إضاءة الليزر ، تنبعث الفلوروفورات الموجودة على مستقبلات AMPA و NMDA من الفلورة.

التصوير بالأشعة تحت الحمراء القريبة من التألق الذاتي ، مما يعزز وضوح الإشارة.

يضمن المسح عالي الدقة أيضا تمايزا واضحا لإشارات التألق ، مما يتيح التصور الدقيق لمستقبلات AMPA و NMDA القريبة في اللوزة.

باستخدام برنامج التصوير ، احسب نسبة شدة التألق AMPA / NMDA في منطقة معينة ذات أهمية كعلامة على التعلم والذاكرة.

ضع الشرائح على واجهة المسح الضوئي بالأشعة تحت الحمراء القريبة بحيث يكون النسيج متجها لأسفل. صور شرائح متعددة في وقت واحد باستخدام أداة تحديد. قم بتصوير الشرائح باستخدام أعلى إعداد جودة ، بدقة 21 ميكرومتر. في إزاحة 0 نانومتر ، قم باستيراد الصور إلى برنامج تحليل الصور لعرضها ووضع علامة عليها لتحليل البروتين شبه الكمي.

بعد فتح برنامج تحليل الصور ، حدد منطقة العمل التي تم مسح الصورة ضوئيا فيها. بعد ذلك ، افتح الصورة الممسوحة ضوئيا في برنامج تحليل الصور لعرض المسح الضوئي ، واضبط الأطوال الموجية والتباين والسطوع والتكبير المعروض دون تغيير الصورة الأولية أو إجمالي الانبعاثات الكمية.

بعد تحديد المناطق الرئيسية للقياس الكمي ، حدد علامة التبويب تحليل على طول الجزء العلوي من الصفحة ، ثم حدد رسم مستطيل لرسم مستطيل فوق المنطقة التي سيتم تحديدها كميا. لعرض حجم المستطيل، حدد الأشكال على طول الجزء السفلي الأيسر من الشاشة. ثم حدد الأعمدة على طول أسفل اليمين. ثم أضف عمودي الارتفاع والعرض لتحديد حجم الشكل. أخيرا ، قم بتسمية الشكل وكرر. بمجرد أخذ عينات من جميع المناطق، تابع دمج البيانات المتوفرة وتحليلها من علامة التبويب الأعمدة.