تصور الميتوكوندريا داخل الألياف العصبية داخل البشرة

تبدأ مع قسم أنسجة الجلد البشرة يحتوي على الألياف العصبية داخل البشرة أو IENFs, نهايات الخلايا العصبية الحسية رقيقة.

IENFs غنية بالميتوكوندريا, توفير الطاقة لنقل إشارة الخلايا العصبية.

وقد وصفت الأنسجة بالفلورسنت IENFs, الميتوكوندريا, ونواة البشرة.

باستخدام مجهر متحد البؤر المقلوب ، احصل بالتتابع على إشارات فلورية منفصلة بأطوال موجية مناسبة للنوى و IENFs والميتوكوندريا.

قم بتنشيط المسح المباشر لالتقاط إشارة IENF ، بما في ذلك طبقة البشرة.

بعد ذلك ، قم بإجراء مسح متسلسل لكل إشارة للتخلص من الحديث المتبادل لإشارة التألق.

من الصورة المدمجة ، باستخدام البرنامج ، قم بقص وعزل خلايا البشرة ذات الفلور الأزرق.

بعد ذلك ، قم بمعالجة المنطقة المقصوصة لتعزيز دقة إشارات IENF الخضراء وإشارات الميتوكوندريا الحمراء.

بعد ذلك ، قم بإنشاء صورة سطحية ثلاثية الأبعاد لإنشاء قناع ل IENFs ، ثم قم بتراكب صورة سطح الميتوكوندريا لعزل الميتوكوندريا الخاصة بالأعصاب.

في الإخراج النهائي ، تظهر IENFs في سماوي ، بينما تظهر الميتوكوندريا كهياكل صغيرة بلون أرجواني.

حدد هدف الغمر بالزيت 40x على مجهر متحد البؤر للمسح الضوئي بالليزر المقلوب. حدد الليزر وأجهزة الكشف المناسبة لتصوير النوى والألياف العصبية والميتوكوندريا. أدخل معلمات المسح الضوئي التالية في دقة شدة 12 بت لبرنامج المجهر. معدل مسح ضوئي يبلغ 600 هرتز بمتوسط إطارين وتكبير 2.2. اضبط برنامج المجهر للحصول على دقة جانبية محسنة عن طريق تحديد دقة مسح ضوئي تبلغ 1024 × 1024. قم بتحسين الدقة المحورية والتقسيم البصري عن طريق تحديد فتحة بؤرية لوحدة واحدة جيدة التهوية بحجم خطوة z يبلغ 210 نانومتر.

امسح كل إشارة على حدة ، واضبط جهد الكاشف والإزاحة لإزالة أي وحدات بكسل مشبعة زائدة وتحتها. قم بتنشيط المسح المباشر للإشارة العصبية ، واضبط التحكم في التركيز z للعثور على المستويين البؤريين العلوي والسفلي وضبطهما في برنامج المجهر الذي يشمل الإشارة العصبية داخل قسم الأنسجة. امسح السلسلة z النهائية ضوئيا باستخدام المسح المتسلسل للتخلص من التداخل بين إشارة الفلورسنت.

اعزل البشرة عن الطبقة القرنية والأدمة عن طريق رسم منطقة حول البشرة ، باستخدام أداة تحديد على صورة مكررة للصورة الأصلية. ثم قم بقص الصورة إلى التحديد. احسب وظائف انتشار النقطة للإشارات متحدة البؤر الفلورية الخضراء والحمراء ، باستخدام ميزة حساب الدالة الانتشار. ثم قم بتعيين معلمات معامل الانكسار المتوسط للزيت عند 1.515 ، والفتحة العددية لهدف الزيت 40x عند 1.25. اضبط ثقب الكاشف في منطقة واحدة ووحدة واختر الطول الموجي لإثارة الليزر.

استخدم ضبط الاستعادة التكرارية على ثقة 100٪ ، وحد التكرار البالغ 10 دورات ، و PSFs الأخضر والأحمر لإزالة الالتفاف بين إشارات التألق الأخضر والأحمر. استخدم أداة إنشاء سطح لإنشاء سطح حول الإشارات العصبية غير الملتوية ، وتحديد ميزة سلسة غير محددة ، والكثافة المطلقة للعتبة ، وعتبة أقل تبلغ 3,000 ، وعتبة عليا تبلغ 65,535. حافظ على الأسطح فوق 10 فوكسيل.

قم بإزالة الأسطح غير العصبية باستخدام علامة التبويب تحرير في سطح العصب لتحديد أسطح مفردة غير عصبية، أو اضغط باستمرار على مفتاح التحكم لتحديد أسطح متعددة غير عصبية. احذف الأسطح غير العصبية المحددة بالضغط على الزر حذف. استخدم علامة التبويب تحرير في سطح العصب، واضغط على الزر قناع الكل في خصائص القناع.

في النافذة الجديدة ، حدد القناة 5 الميتوكوندريا Deconvolved ضمن تحديد القناة ، ثم تحقق من القناة المكررة قبل تطبيق القناع. اضغط على زر الاختيار للثبات من الداخل الخارجي ، وتحقق من ضبط فوكسل السطح الخارجي إلى 0.0. واضغط على الزر "موافق".

أخيرا ، قم بإنشاء أسطح خاصة بالميتوكوندريا باستخدام أداة إنشاء سطح لإنشاء سطح حول إشارات الميتوكوندريا المقنعة غير الملتوية عن طريق تحديد ميزة Smooth غير المحددة ، واستخدام طرح الخلفية للعتبة. اضبط قطر أكبر كرة على 1.50 ميكرومتر ، والعتبة الدنيا على 2,000 ، والعتبة العليا على 65,535 كحد أقصى. تأكد من إبقاء الأسطح أعلى من 1.0 فوكسل.