موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:31 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بغرفة تصوير تحتوي على نبتة ذبابة الفاكهة الدماغ المغمورة في مخزن مؤقت للحفاظ على الوظيفة الخلوية.
تعبر الخلايا العصبية في الدماغ عن مؤشرات الكالسيوم الفلورية السيتوبلازمية ، والتي ترتبط بأيونات الكالسيوم والفلوريس.
ضع غرفة التصوير تحت مجهر فلوري مزود بعدسة غمر الماء.
اخفض العدسة ، وتحت إضاءة المجال الساطع ، ركز على الدماغ.
قم بالتبديل إلى وضع التألق والتقط الصورة.
بعد ذلك ، أدخل الببتيد العصبي في المخزن المؤقت وابدأ التسجيل بفاصل زمني.
يرتبط الببتيد العصبي بمستقبلاته على الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى إرسال إشارات داخل الخلايا. هذا يفتح قنوات الكالسيوم ويسمح بتدفق أيونات الكالسيوم.
ترتبط أيونات الكالسيوم هذه بالمؤشرات وتزيد من شدة التألق.
استعادة الصورة بعد تحفيز الببتيد العصبي.
قارن الصور قبل وبعد تحفيز الببتيد العصبي.
تعكس الزيادة في شدة التألق بعد تحفيز الببتيد العصبي استجابة ذبابة الفاكهة للإشارة إلى الببتيد العصبي.
للحصول على صور مضان الكالسيوم ، ضع غرفة التصوير التي تحتوي على نبتة الدماغ تحت المجهر. اخفض العدسة الموضوعية حتى تلامس PBS. وتحت إضاءة المجال الساطع ، ضع الدماغ واجعله في بؤرة التركيز.
قم بالتبديل إلى ضوء الفلورسنت واضبط التركيز على الخلايا المسماة GCaMP6. ابدأ عملية الاستحواذ بسرعة 250 مللي ثانية لكل إطار بدقة 512 × 512 بكسل في وضع تبريد الماء. بعد ذلك ، اضبط وقت التعرض للحصول على قيم التألق ضمن النطاق الديناميكي لكاميرا CCD ، ولكن ليس أقل من 1,000 وحدة عشوائية مع صور 16 بت.
بمجرد تحديد معلمات التصوير ، التقط الصور لمدة دقيقة واحدة قبل إعطاء الببتيد للكشف عن شدة إشارة خط الأساس. بعد ذلك ، قم بتطبيق ببتيد الاختبار مباشرة عن طريق سحب 100 ميكرولتر من محلول الببتيد المحضر في حمام اليرقات. سجل انبعاث GCaMP6 لبضع دقائق.