JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:56 د • May 29th, 2025
خذ قسما سهميا من دماغ الفأر لكشف البطينين ، وهما تجاويف مملوءة بالسائل الدماغي النخاعي ، أو السائل النخاعي.
تمتلكالخلايا البطانية البطانية المبطنة للأهداب المتحركة التي تدفع السائل الدماغي النخاعي لتسهيل الدورة الدموية.
ضع القسم في طبق زجاجي يحتوي على وسط غني بالمغذيات للحفاظ على النشاط الهدبي.
انقل الطبق إلى الغرفة التي يتم التحكم فيها بالمناخ لمجهر تباين التداخل التفاضلي ، أو DIC ، للحفاظ على بقاء الخلية أثناء التصوير.
يستخدمالفحص المجهري DIC منشورا لتقسيم الضوء المستقطب ، وتوجيهه عبر العينة على طول مسارات مختلفة.
تؤديالاختلافات في معامل الانكسار عبر العينة إلى اختلافات في الطور بين الحزم.
يعيد المنشور الثاني تجميع الحزم ، مما يخلق تداخلا ينتج صورة عالية التباين مع تأثير ثلاثي الأبعاد ، مما يعزز رؤية الهياكل الدقيقة.
حدد موقع الخلايا البطانية العصبية الوظيفية ذات الأهداب المتحركة من خلال مراقبة حركة الفقاعات الناتجة عن ضربها.
باستخدام تصوير DIC عالي التباين ، سجل الأهداب لتحديد تردد الضرب.
لتصوير الأقسام ، ضع شرائح الدماغ في أطباق ثقافة ذات قاع زجاجي مقاس 30 ملم تحتوي على 1 مليلتر من وسط عالي الجلوكوز ، واضبط بيئة غرفة المجهر المغلقة على 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون ، باستخدام عدسة غمر بالزيت الموضوعية 60x.
بعد ذلك ، ركز على الخلايا ذات الضوء المنقول بشكل منتظم DIC. بعد ذلك ، باتباع اتجاه حركة فقاعة DMEM ، كدليل لموقع الأهداب البطانية البطانية المتحركة ، استخدم مرشح DIC لتحديد منطقة تحتوي على خلايا سليمة ذات أهداب متحركة في البطين الجانبي للدماغ. عند تحديد الأهداب البطانية العصانية ، اضبط الضوء وركز للحصول على صورة مرضية.
بعد ذلك ، قم بتعيين معلمات التصوير المباشر في برنامج التصوير. على سبيل المثال ، هنا يتم الحصول على صور 24 بت ، مع ضبط تجميع الكاميرا على 1 في 1 ، جنبا إلى جنب مع هدف 60x ، ووقت تعريض من 5 إلى 10 مللي ثانية.
افتح فتحة المجهر إلى المستوى الأمثل لأقل وقت تعريض ضوئي ، واجمع صور DIC. راقب تدفق الصور الحية إلى الكاميرا لتوفير الحصول على الصور بسرعة وفورية دون تأخير. يمكن بعد ذلك حساب سرعة ضرب الأهداب بناء على متطلبات الحد الأدنى من أوقات التعرض للحصول على تباين كاف في الصورة.