موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:52 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بإعداد ضوء الإثارة للمجهر ثنائي الفوتون.
خذ جرو فأر معدلا وراثيا مخدرا مع نافذة تصوير زجاجية دائرية ولوحة رأس مزروعة في جمجمته.
تعبر الخلايا العصبية عن بروتينات الفلورسنت الحمراء لتسهيل التصوير.
قم بتنظيف نافذة التصوير الزجاجية وقم بتأمين الجرو في مرحلة التصوير ثنائي الفوتون.
قم بمحاذاة نافذة التصوير مع هدف المجهر عن طريق ضبط رأس الجرو.
استخدم وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة جسم الجرو.
اضبط معدل تدفق التخدير.
ضع قطرة ماء على الغطاء ، ثم اخفض العدسة الموضوعية للمجهر.
يستخدم الفحص المجهري ثنائي الفوتون فوتونين من الضوء لتنشيط بروتينات الفلورسنت ، مما يسمح بتصوير عصبي مفصل مع الحد الأدنى من ضوضاء الخلفية والتبييض الضوئي.
التقط صورا للخلايا العصبية على أعماق مختلفة لتصور هيكلها أخيرا
، قم بتكديس الصور لإنشاء تمثيل ثلاثي الأبعاد للخلايا العصبية ، بما في ذلك إسقاطاتها العصبية ، لدراسة التغيرات المورفولوجية المرتبطة بالنمو.
لبدء التصوير ، قم أولا بتعيين الطول الموجي لليزر ثنائي الفوتون. لإثارة RFP ، استخدم طولا موجيا يبلغ 1,000 نانومتر. امسح سطح زلة الغطاء بنسبة 70٪ من الإيثانول. قم بتوصيل الجرو المخدر بلوحة التيتانيوم في مرحلة التصوير باستخدام قضيب التيتانيوم. استخدم مرحلة مقياس الزوايا لضبط الرأس بحيث يكون انزلاق الغطاء موازيا للعدسة الموضوعية.
حافظ على درجة حرارة جسم الجرو أثناء التصوير ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية