موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:58 دقيقة • May 29th, 2025
ابدأ بفأرة مخدرة مع غطاء أمامي مثبت فوق نافذة قشرية رقيقة معدة جراحيا.
ضع الفأر ضعيفا. قم بإزالة جلد الفخذ الإنسي لكشف الوريد الفخذي.
حقن صبغة فلورية مترافقة في الوريد لتسمية بلازما الدم ، مما يتيح تصور الأوعية الدموية.
خياطة الشق.
اقلب الماوس وقم بتأمين الصفيحة الأمامية في حزام لتثبيت الماوس.
انقل الإعداد إلى مرحلة المجهر ثنائي الفوتون.
أضف المحلول الملحي فوق النافذة القشرية. اخفض العدسة الموضوعية حتى تلامس المحلول الملحي.
باستخدام إضاءة المجال الساطع، حدد موقع منطقة التصوير.
قم بالتبديل إلى التصوير ثنائي الفوتون.
يركز ليزر المجهر الضوء القريب من الأشعة تحت الحمراء منخفض الطاقة في الدماغ.
في النقطة المحورية لليزر ، يجمع فوتونان طاقتهما لإثارة الصبغة ، مما يجعل الأوعية الدموية تتألق.
حدد السرير الشعري - شبكة من الأوعية الدموية الصغيرة التي تربط الشرايين بالأوردة - وقم بتكبيره.
الحصول على صور لتحليل الأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ.
في هذا الإجراء ، قم بإزالة الجلد الموجود على الفخذ الأيسر الإنسي للفأر. بعد ذلك ، حدد موقع الوريد الفخذي. باستخدام حقنة سعة 1 مليلتر وإبرة قياس 30 ، ارسم 130 ميكرولترا من محلول صبغة الفلورسنت. حقن 100 ميكرولتر من الصبغة ببطء في الوريد الفخذي.
بعد إزالة الإبرة ، ضع ضغطا ثابتا ولطيفا على موقع الحقن لوقف أي نزيف ، واترك الصبغة تنتشر لمدة خمس دقائق. ثم أغلق موقع الجراحة بالغرز. اقلب الماوس بحذر على بطنه وضعه في حزام لوحة رأس الماوس. للتصوير ثنائي الفوتون في الجسم الحي ، انقل الجهاز الجراحي إلى المجهر ثنائي الفوتون ، وتأكد من الحفاظ على مستوى تخدير.
بعد ذلك ، ضع كمية صغيرة من محلول ملحي بنسبة 0.9٪ في خزان لوحة الرأس ، وقم بخفض هدف المجهر بحيث يتلامس مع المحلول الملحي. بعد ذلك ، حدد موقع منطقة الاهتمام ، باستخدام هدف عرض المجال الساطع. بعد ذلك ، ابدأ التصوير ثنائي الفوتون. حدد موقع سرير شعري على شاشة العرض، وقم بتكبير هذه المنطقة باستخدام التكبير/التصغير البصري 2. احصل على صور للشعيرات الدموية باستخدام برنامج التصوير ثنائي الفوتون.