التصوير الفلوري مدى الحياة لتراكم بروتين PolyQ في الخلايا العصبية Caenorhabditis elegans
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:36 دقيقة • June 17th, 2025
ابدأ بالتحكم المخدر والمطابق للعمر والديدان Caenorhabditis elegans التي تعاني من نقص في المرافق.
تعبر كلتا المجموعتين عن بروتينات polyQ الموسومة بالفلوروفور في الخلايا العصبية الخاصة بهما المعرضة للطي بشكل خاطئ.
في الديدان الضابطة ، تحد بروتينات المرافق من تجميع polyQ غير المطوي ، بينما في الديدان التي تعاني من نقص المرافق ، يشكل polyQ غير المطوي مجاميع بسهولة.
ضع شريحة التحكم على مرحلة المجهر متحد البؤر للفحص المجهري للتصوير مدى الحياة الفلوري (FLIM).
قم بإضاءة الديدان باستخدام ليزر نابض.
يثير الليزر الفلوروفور ، الذي ينبعث منه فوتون عند عودته إلى الحالة الأرضية.
يقيس FLIM عمر التألق - المدة التي يظل فيها الفلوروفور في حالته المثارة.
في الديدان التي تعاني من نقص في المرافقة ، يقوم تجميع polyQ بتجميع الفلوروفورات ، مما يعزز نقل الطاقة بين الفلوروفورات المجاورة بدلا من انبعاث الفوتون ، وبالتالي تقليل عمر التألق.
يعالج برنامج FLIM هذه الأعمار لإنشاء خرائط مرمزة بالألوان ، مما يتيح تصور التجميع.
يشير انخفاض عمر التألق في الديدان التي تعاني من نقص المرافق ، مقارنة بالضوابط ، إلى زيادة تراكم polyQ.
تأكد من أن الديدان الخيطية غير متحركة تماما. افتح برنامج اكتساب FLIM. حدد موقع الزر Tab واضغط على تمكين المخرجات. ضع الشريحة مع C. ايليجانس المثبتة على المسرح ، وباستخدام عدسة تكبير 10 مرات في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية