تصوير الخلايا الحية للهجرة النووية الدبقية لمولر أثناء تجديد شبكية الزرد

ابدأ بمستحضر شبكية ظهرية مدمجة في الاغاروز من سمكة الزرد المعدلة وراثيا ، مثبتة في فلوروديش مع وسائط.

تظهر

شبكية العين تلفا في المستقبلات الضوئية الناجمة عن الضوء وتحتوي على خلايا مولر الدبقية أو MGCs مع نوى تعبر عن GFP.

ضع الطبق في غرفة مجهر متعددة الفوتونات.

باستخدام إضاءة المجال الساطع ، ركز على شبكية العين.

قم بالتبديل إلى وضع التألق لتحديد موقع MGCs.

قم بتكوين مكدس z من طبقة الخلية العقدية أو GCL إلى الطبقة النووية الخارجية أو ONL.

ابدأ التصوير المباشر.

تطلق المستقبلات الضوئية التالفة TNF-α ، مما يؤدي إلى تنشيط MGCs.

تهاجر نوى MGC بشكل أساسي داخل الطبقة النووية الداخلية أو INL لتكرار الحمض النووي الخاص بها.

بعد ذلك ، تهاجر النوى قمي إلى ONL للخضوع للانقسام ، مما ينتج عنه أسلاف عصبية.

بعد الانقسام ، تهاجر نوى وأسلاف MGC بشكل أساسي إلى INL.

تتكاثر الأسلاف ، وتهاجر إلى موقع الإصابة ، وتتمايز إلى مستقبلات ضوئية ، مما يتيح تجديد الشبكية.

تحليل الصور الملتقطة لتصور الهجرة النووية.

في برنامج الحصول على الصور ، افتح نوافذ A1 MP GUI و TiPad و A1 Compact GUI و ND Acquisition. للتصوير متعدد الفوتونات، تأكد من اختيار خيار IR NDD في نافذة واجهة المستخدم الرسومية المدمجة A1. بعد ذلك ، في حقل الإعداد ، حدد IR-DM لأول مرآة ثنائية اللون وتحقق من ضبط مرشح ممر النطاق على 525 إلى 50 للحصول على مضان GFP.

بعد ذ