موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 1:56 دقيقة • June 17th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار مطلية بالبوليمر تحتوي على خلايا القشرة الدماغية الأولية الجنينية للفأر ، مثل الخلايا السلفية والعصبية. يتم نقل الخلايا السلفية للتعبير عن بروتينات الفلورسنت لوضع العلامات والتتبع.
انقل اللوحة إلى غرفة الحضانة المسخنة مسبقا لمجهر مضان مقلوب للحصول على بيئة تصوير مستقرة.
حدد موقع الموضع المرجعي على اللوحة للحصول على مواقع تصوير متسقة.
حدد حقول تصوير متعددة لكل بئر بتكبير أعلى لزيادة احتمالية مراقبة الخلايا المنقولة.
على فترات منتظمة ، التقط في نفس الوقت صورا على تباين الطور للكشف عن مورفولوجيا الخلية وديناميكياتها ، وصور الفلورسنت لمراقبة تعبير البروتين الفلوري.
قارن بين تباين الطور بفاصل زمني وصور الفلورسنت لتتبع انقسام الخلايا السلفية وتمايزها إلى سلالات عصبية.
لتصوير الخلايا المنقولة بالفيروسات القهقرية ، ضع لوحة زراعة الأنسجة في غرفة تصوير متصلة بأجهزة التحكم في درجة الحرارة وثاني أكسيد الكربون للحفاظ على الخلايا في ظروف ثابتة تبلغ 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.
حدد موضعا في المحور XY ليكون بمثابة نقطة صفر، وقم بمعايرة نقطة الصفر. حدد من 10 إلى 15 وضعا لكل بئر ليتم تصويرها بتكبير 10 أضعاف. اضبط البرنامج للحصول على صور تباين الطور كل خمس دقائق وصور مضان كل ثلاث ساعات لتقليل السمية الضوئية. تحقق من التركيز واضبطه في الساعات الثلاث الأولى من التجربة ، حيث قد يتغير أثناء توازن درجة الحرارة.