التصوير خارج الجسم الحي لهجرة الخلايا الحبيبية المخيخية بعد الولادة باستخدام تنظير الماكروس متحد البؤر

ابدئي بشريحة مخيخية تم الحصول عليها من دماغ جرو الفئران بعد الولادة في طبق متعدد الآبار يحتوي على وسائط.

قم بإزالة الوسائط واحتضان الشريحة في محلول صبغة فلورية سيتوبلازمية لتسمية الخلايا الحبيبية (GCs).

انقل الشريحة إلى غشاء إدراج بئر وقم بإزالة أي صبغة زائدة.

قم بإزالة الملحق واملأ البئر بالوسائط. ثم استبدل الملحق وأضف الوسائط لتغطية المنديل.

احتضن للسماح للأنسجة بالالتصاق بالغشاء الداخلي.

انقل اللوحة إلى حاضنة متصلة بمنظار متحد البؤر وضع غطاء زجاجي فوق اللوحة.

اضبط ظروف الثقافة ، واحتضن الأنسجة أكثر ، ثم ابدأ في التصوير.

عند إضاءة الليزر ، تتألق GCs المسماة.

التقط صورا بفاصل زمني لتصور الهجرة الشعاعية ل GCs عبر الطبقة الجزيئية للمخيخ.

باستخدام برنامج التصوير ، قم بتحليل مسافة الهجرة ل GCs.

بعد تقطيع العينة إلى شرائح ، استخدم ماصة لمبة بيضاء مقطوعة لنقلها مع بعض HBSS إلى صفيحة من ستة آبار. قم بتحميل ما يصل إلى ثلاث شرائح في كل بئر. بعد ذلك ، بعد إفراغ الوسائط في كل بئر محملة ، أضف خمسة ملليلتر من محلول التحميل الذي يحتوي على 10 ميكرومولار من صبغة الفلورسنت. لحماية العينات من الضوء ، قم بتغطية اللوحة بورق الألمنيوم. ثم ضع اللوحة على مطفرة مضبوطة على 35 دورة في الدقيقة. دع اللوحة تحتضن لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة للسماح للصبغة بتسمية الخلايا.

الآن ، انقل الشرائح كما كان من قبل إلى غشاء