التصوير بفاصل زمني لانقسام الخلايا الجذعية العصبية للفأر باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا جذعية عصبية ملتصقة أو الخلايا الجذعية العصبية المعزولة من دماغ الفأر المعدل وراثيا. تحتوي هذه الخلايا السرطانية على بروتين مميز بالفلورسنت خاص بمرحلة النمو الأول أو G1.

عندما ينقسم NSC ، فإنه يتألق في المرحلة G1 من دورة الخلية بينما لا ينبعث منه أي مضان في مراحل أخرى.

ضع اللوحة في غرفة تصوير مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر ، ويتم الحفاظ عليها في درجة حرارة مضبوطة.

حدد العدسة الموضوعية المطلوبة واضبط شدة التألق.

قم بتكوين معلمات التصوير بفاصل زمني.

اختر خيار الصورة الكبيرة وجدولة الحصول على الصور على فترات منتظمة للمدة المطلوبة.

استخدم ماسحا ضوئيا عالي السرعة للرنين لتجنب التبييض الضوئي والحفاظ على الدقة العالية.

استخدم إعداد المجال الساطع لتصور شكل الخلية ، واستخدم مرشح فلورسنت مناسب لالتقاط الفلورة.

ابدأ التصوير بفاصل زمني ل NSC لتصور مراحل دورة الخلية المختلفة.

قم بإعداد مجهر مسح ضوئي بالليزر متحد البؤر للتصوير عن طريق التسخين المسبق لغرفة التحكم في درجة الحرارة المرفقة إلى 37 درجة مئوية تحت جو من ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪. ضع اللوحة المكونة من 96 بئرا داخل غرفة المجهر الدافئة مسبقا واجعل البئر الأول في بؤرة التركيز. بعد ذلك ، افتح برنامج التصوير وانقر بزر الماوس الأيمن في النافذة الرئيسية لتحديد اكتساب عناصر التحكم وإلغاء الاستحواذ لفتح لوحة TI وتحديد هدف خطة Apo VC 20x DIC.

بعد ذلك ، انقر فوق الحصول على عناصر تحكم الاكتساب ، ثم افتح خيارات الفاصل الزمني. اضبط مركز كل بئر كموضع مسرح وحدد خيار الصورة الكبيرة إلى 7 × 7 ملليمترات مربعة. لاحظ صورة فسيفساء حول مركز كل بئر. اضبط التداخل لصورة الفسيفساء الكبيرة على 5٪ واضبط التردد بحيث يتم التقاط الصور كل 20 دقيقة لمدة 24 ساعة.

ضمن إعدادات A1 plus ، حدد مستوى جهد أنبوب مضاعف الضوء لكل مضان مدرج في شريط القائمة. حدد للحصول على الصور باستخدام ماسح ضوئي رنين عالي السرعة بتنسيق 512 × 512 بكسل، واستخدم DIC لتصور الخلايا. ثم حدد المجلد لحفظ ملفات البيانات. حدد الزر تشغيل الآن في نافذة اكتساب ND لبدء الاستحواذ.