JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:24 د • June 17th, 2025
ابدأ بفأر مخدر مؤمن في نظام قفص متنقل.
يحتوي الفأر على عدسة معامل انكسار متدرج مزروعة مسبقا تستهدف اللوزة الدماغية ، حيث تعبر الخلايا العصبية عن بروتين فلوري حساس للكالسيوم.
سطح العدسة مغطى للحماية.
اسمح للماوس بالاستيقاظ ، ثم استخدم تدفق الهواء لدوران القفص بدون احتكاك.
قم بإزالة غطاء العدسة وضع مجهر مصغر فوق الدماغ.
قم بتشغيل مؤشر LED الخاص بالمجهر. بعد ذلك ، قم بمحاذاة المجهر بحيث تكون العدسة في منتصف مجال الرؤية.
التقط صورة العدسة واضبط موضع المجهر.
أثناء دوران القفص ، تولد حركات ساق الفأر الخوف ، مما يحفز الخلايا العصبية اللوزة.
يؤدي هذا إلى تدفق أيونات الكالسيوم ، والتي ترتبط بمؤشرات الفلورسنت.
يثير ضوء LED هذه المؤشرات المرتبطة بالكالسيوم ، مما يؤدي إلى تألقها.
تلتقط عدسة معامل الانكسار المتدرج هذا التألق وتنقله بكفاءة إلى المجهر.
يتيح ذلك تصوير الكالسيوم في الوقت الفعلي للنشاط العصبي للوزة.
لتقييم جودة زرع عدسة GRIN ، ضع قفصا كربونيا تحت الماوس المخدر على قضيب الرأس لنظام قفص منزلي متنقل ، وقم بتشغيل تدفق الهواء بحيث يتحرك القفص بحرية دون احتكاك. استخدم قابض مجهر ومناور تجسيمي لمحاذاة مجهر مصغر رأسيا مع الإطار ، قبل خفض المجهر حتى يظهر سطح عدسة GRIN المزروعة في مجال رؤية الصورة داخل البرنامج. قم بمحاذاة مركز عدسة GRIN المزروعة مع مركز مجال الرؤية ، والتقط صورة لسطح عدسة GRIN المزروعة. بعد ذلك ، ارفع العدسة الموضوعية للمجهر ببطء أثناء مراقبة الصورة لظهور الخلايا التي تعبر عن GCaMP.