موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:18 دقيقة • June 17th, 2025
خذ الخلايا العصبية القشرية الأولية للقوارض المزروعة على طبق زجاجي مغلف يحتوي على وسائط.
تعبر هذه الخلايا عن بروتين مرتبط بمرض التصلب الجانبي الضموري مشفرا وراثيا ومستشعر حيوي للكالسيوم.
استبدل الوسائط بمخزن مؤقت منخفض كلوريد البوتاسيوم.
احتضان للحفاظ على نشاط الخلايا العصبية أثناء الراحة ومستويات الكالسيوم الأساسية.
قم بتركيب الطبق على مرحلة المجهر متحد البؤر ووضع أنبوب التروية.
باستخدام إضاءة المجال الساطع ، ركز على الخلايا العصبية ، ثم انتقل إلى التصوير الفلوري.
باستخدام ليزر المجهر ، قم بإثارة المستشعر الحيوي وتسجيل انبعاث التألق لتحديد مستويات الكالسيوم داخل الخلايا الأساسية.
بعد ذلك ، قم بتغذية الطبق بمحلول كلوريد البوتاسيوم العالي.
يعمل تركيز البوتاسيوم العالي على إزالة استقطاب الخلايا العصبية ، وفتح قنوات الكالسيوم ذات الجهد الكهربائي في أطراف ما قبل المشبكي. هذا يسمح بتدفق الكالسيوم ، الذي يبدأ النشاط المشبكي العصبي.
يرتبط الكالسيوم المتزايد داخل الخلايا بالمستشعر الحيوي ، مما يتسبب في حدوث تغيير توافقي يعزز التألق.
استمر في تسجيل التألق لقياس التغيرات في الوقت الفعلي في مستويات الكالسيوم داخل الخلايا ، مما يكشف عن النشاط المشبكي العصبي.
بعد48 ساعة من التعدي باستخدام GCaMP6m ، احتضن الخلايا العصبية القشرية الأولية للقوارض مع انخفاض كلوريد البوتاسيوم ACSF لمدة 15 دقيقة. ثم قم بتركيب
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية