تصوير الكالسيوم في الوقت الحقيقي لقشرة الفص الجبهي الإنسي للفأر باستخدام منظار مصغر

خذ فأرا مخدرا منزولا مزروعا بعدسة ذات مؤشر متدرج تستهدف قشرة الفص الجبهي الإنسي ، حيث تعبر الخلايا العصبية عن مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا.

قم بإزالة غطاء العدسة وتنظيف سطحه لنقل الضوء بوضوح.

قم بتثبيت المنظار المصغر بحامل العدسة.

اضبط موضع المنظار المصغر لتحديد المستوى البؤري الأمثل. يضمن هذا التعديل تصورا واضحا لأجسام الخلايا العصبية.

افصل الكابل واترك الماوس يتعافى.

قم بتوصيل الكبل بالمنظار المصغر وانقل الماوس إلى غرفة بها إعداد تسجيل سلوكي.

أثناء التصوير ، ينبعث المنظار المصغر من الضوء لإثارة مؤشرات الكالسيوم ، والتي تتألق عند تدفق الكالسيوم داخل الخلايا.

تنقل عدسة مؤشر التدرج هذه الإشارات الضوئية من أنسجة المخ العميقة إلى المنظار المصغر ، مما يقلل من تشتت الضوء ويتيح التصور في الوقت الفعلي للنشاط العصبي.

قم بمعالجة النشاط العابر للكالسيوم المسجل مع الملاحظات السلوكية لربط النشاط العصبي بسلوكيات محددة.

بعد تخدير الماوس لفترة وجيزة باستخدام الأيزوفلوران ، قم بفك برغي القفل في القاعدة بمفك براغي صغير قبل إزالة الغطاء الواقي ، وقم بتنظيف سطح عدسة GRIN بقطعة قطن مبللة بالأسيتون. قم بتوصيل المنظار المصغر بالكابل وابدأ تشغيل برنامج NewView لبدء تحديد أفضل مستوى بؤري مع ضبط موضع المنظار المصغر بالنسبة للقاعدة عن طريق الشد أو التخفيف قليلا بمساعدة ملقط حاد. بمجرد تحديد أفضل مستوى بؤري ، قم بإحكام ربط برغي القفل قبل فصل الكبل وإعادة الماوس إلى قفص منزله.

قم بتشغيل برنامج كاميرا السلوك لعرض ساحة سلوك الماوس من خلال وظيفة البث المباشر. اضبط تركيز الكاميرا العلوية يدويا. حدد Trigger Strobe وحدد تمكين / تعطيل المشغل متبوعا بالنقر فوق الزر "تسجيل". بعد ذلك، استخدم التصفح لتحديد الموقع الذي سيتم حفظ تسجيلات السلوك فيه. حدد تنسيق الصورة المطلوب.

قرب الماوس من الساحة وقم بتوصيل المنظار المصغر بالكابل المرتبط بنظام الحصول على البيانات. ثم ضع الماوس في وسط الساحة. في برنامج كاميرا السلوك ، انقر فوق بدء التسجيل.

في NewView ، تحقق من LED1 ، وانقر فوق الالتقاط ثم قم بتشغيل الأزرار لبدء التسجيل. هذا يسمح بالتسجيلات المتزامنة لتصوير الكالسيوم وسلوك الفأر. اضغط على إيقاف بعد 3,000 إطار واحفظ الملفات.