تصور هجرة خلايا القمة العصبية في جنين الزرد باستخدام التصوير بفاصل زمني متعدد الفوتون

ابدأ بجنين أسماك الزرد الحي المعدل وراثيا المكتظ في agarose منخفض نقطة الانصهار ويوضع في غرفة مليئة بوسائط الجنين.

يعبر الجنين عن خلايا القمة العصبية المسماة بالبروتين الفلوري الأخضر المعزز (EGFP).

ضع الغرفة على مرحلة المجهر. باستخدام إضاءة المجال الساطع ، اضبط الهدف لتركيز الجنين وتوسيطه في مجال الرؤية.

قم بالتبديل إلى هدف الغمر في الماء وأعد التركيز على الجنين.

اضبط معلمات التصوير للحصول على صور Z-stack من الحافة الجانبية إلى الحافة الإنسية ، مع التقاط عرض العين.

قم بإيقاف تشغيل إضاءة المجال الساطع ، وقم بتغطية المسرح ، وابدأ التصوير بفاصل زمني.

أعد ملء الغرفة بالوسائط حسب الحاجة أثناء التصوير.

تحت إضاءة الليزر ، تتألق خلايا القمة العصبية.

تصور هجرة هذه الخلايا من الأنبوب العصبي إلى المناطق القحفية الوجهية ، حول العين النامية لملء اللحمة المتوسطة حول العين والعملية الجبهية ، وبطنيا لتشكيل الأقواس البلعومية.

بعد وضع الإعداد بالكامل على مسرح المجهر ، وفقا لبروتوكول النص ، استخدم هدف الخمس مرات لتحديد موقع الجنين. ثم ارفع المسرح يدويا إلى أعلى موضع ، واستخدم التركيز الدقيق لوضع الجنين في منتصف نطاق المجهر.

قم بخفض المرحلة يدويا ، وقم بتغيير هدف الخمس مرات إلى هدف الغمر في الماء 25 مرة. ارفع المسرح بعناية لإعادة الجنين إلى التركيز. في البرنامج ، انقر فوق وضع xyzt للحصول على صور متعددة في الوق