التصوير في الجسم الحي لدماغ يرقات الزرد لتصور الخلايا العصبية المخيخية

ابدأ مع يرقات الزرد المعدلة وراثيا المخدرة في غرفة تركيب تحتوي على عازلة فسيولوجية مؤكسجة تحت مجهر مجسم.

يحتوي

المخيخ في الدماغ على خلايا عصبية بركنجي معدلة وراثيا تعبر عن بروتينات السيتوبلازم الفلورية.

قم بإزالة الوسط الزائد ، ثم أضف الاغاروز المنصهر لشل حركة اليرقات للحصول على تصوير مستقر.

قم بتوجيه الجانب الظهري لليرقات لأعلى لتصور المخيخ.

بمجرد أن تصلب ، قم بقص الاغاروز الزائد. باستخدام إبرة زجاجية ، قم باستئصال الجلد المصطبغ الذي يغطي الدماغ لفضحه.

اقلب كتلة الاغاروز على غرفة تصوير تحتوي على الاغاروز المنصهر للتصوير تحت المجهر المقلوب.

أضف المخزن المؤقت الفسيولوجي للحفاظ على وظيفة الخلايا العصبية.

ضع الغرفة تحت مجهر متحد البؤر المقلوب. قم بتطبيق ضوء الإثارة لإثارة البروتينات الفلورية ، مما يتيح تصور الخلايا العصبية المسماة.

خلايا

الجلد المصطبغة ، إذا لم تتم إزالتها ، تنتشر وتمتص ضوء الإثارة ، مما يقلل من شدة التألق.

تعمل إزالة الجلد على تحسين تغلغل الضوء لتعزيز شدة التألق ، مما يسهل تصور الخلايا العصبية.

لتضمين اليرقة ، استخدم ماصة باستور لنقل اليرقة المخدر إلى غرفة تركيب تحت مجهر مجسم. إذا كانت أي يرقة لا تزال قادرة على الحركة ، فلا تستخدم الأسماك للتجربة حتى تصبح الأسماك غير قادرة تماما على الحركة. عندما تكون اليرقة غير متحركة ، قم بإزالة الوسط الزائد بعناية وأضف على الفور ما لا يقل