قياس الطيف الكتلي للبلازما المقترن بالحث بالليزر لتصور المعادن في أنسجة دماغ الفئران

ضع عينة من أنسجة دماغ الفأر ومعاييرها في غرفة الاستئصال بالليزر.

تحتوي المعايير على تركيزات معروفة من المعادن المسننة في أنسجة دماغ الضأن.

املأ الغرفة بغاز الأرجون وركز شعاع ليزر فوق بنفسجي على الأنسجة.

يقوم

الليزر بتبخير العينة والمعايير في نمط خطي ، مما يخلق رذاذ من الجسيمات الدقيقة.

يحمل غاز الأرجون الجسيمات إلى البلازما المقترنة بالحث ، وهي مصدر تأين بدرجة حرارة عالية.

تفتيت البلازما وتؤين الجسيمات إلى أيونات موجبة الشحنة.

تدخل الأيونات إلى مطياف الكتلة ويتم فصلها بناء على نسب الكتلة إلى الشحنة.

تتم مقارنة البيانات الناتجة بقاعدة بيانات مرجعية لتحديد المعادن الموجودة في العينة. من المعايير ، يتم إنشاء منحنى معايرة.

احسب تركيزات المعادن في العينة عن طريق معايرة شدة الإشارة مقابل تلك الموجودة في المعايير ، مما يكشف عن التوزيع المكاني للمعادن داخل شريحة الدماغ.

أولا ، ضع عينة من أنسجة المخ وجميع معايير الأنسجة المتطابقة مع المصفوفة في غرفة الاستئصال بالليزر. تأكد من أن العينات تقع ضمن عمق مجال كاميرا LACCD. أغلق باب الغرفة وشد الإصبع البراغي.

ثم في برنامج ICP-MS ، افتح صمام الغاز الناقل واضبط معدل التدفق على 1.2 لتر في الدقيقة. في برنامج LA ، قم بإجراء تطهير لمدة 30 دقيقة لخلية الاستئصال مع الغاز الناقل لخلية استئصال 2 حجم. كل 10 دقائق ، انقل مرحلة العينة إلى كل ركن من أركان الغرفة لتقليل كمية الهواء المتبقي في الخلية.

قم بتشغيل برنامج المقارنات الدولية - MS واترك الجهاز يسخن لمدة ساعتين. أثناء تسخين الأداة ، في برنامج الاستئصال بالليزر ، ارسم خطا للاستئصال يبلغ طوله حوالي 3 ملليمترات عبر سطح معيار الأنسجة الأول. انقر فوق خط الاستئصال واضبط قطر الحزمة الافتراضي وسرعة المسح والطلاقة المشعة. قم بتكرار الخط ست مرات ، مع تباعد الخطوط عن بعضها حسب قطر الحزمة. كرر هذه العملية لكل معيار.

بعد ذلك، استخدم أداة الخط لرسم منطقة الاستئصال فوق العينة من الزاوية اليسرى العليا عبر أوسع نقطة في العينة، باستخدام نفس المعلمات المستخدمة في المعايير.

قم بتكرار الخط حسب الحاجة للتغطية الكاملة للعينة بنفس التباعد المستخدم في المعايير. ثم ارسم مجموعة من الخطوط للمسح المتقطع للمعايير في موعد لا يتجاوز 20 ساعة من مسح العينة أو بين كل عينة. أضف مسحا ضوئيا للمعايير إلى نهاية التجربة.

بناء على طول الخط وسرعة المسح ، حدد وقت التحليل للعينة والخطوط القياسية. ثم قم بإنشاء دفعة جديدة في برنامج ICP-MS وحدد تحليل الوقت الذي تم حله. اختر قيم نسبة الكتلة إلى الشحن ذات الاهتمام، وقم بتعيين أوقات التكامل لكل نسبة، بحيث يكون إجمالي وقت التكامل لدورة واحدة 0.25 ثانية. احفظ الدفعة.

بالنسبة للدفعة القياسية ، املأ وقت التحليل لكل سطر بمخزن مؤقت إضافي مدته 15 ثانية لحساب أوقات الإحماء والغسيل بالليزر. قم بتعيين نموذج قائمة تشغيل مع اكتساب لكل بند قياسي. بالنسبة لدفعة العينة ، قم بتكرار الدفعة القياسية واضبط أوقات وعدد عمليات الاستحواذ وفقا لنمط استئصال العينة.

بمجرد تسخين برنامج المقارنات الدولية - MS ، أضف الدفعة الأولى إلى قائمة الانتظار وتأكد من أن البرنامج ينتظر مشغلا من أداة LA. بعد ذلك ، في برنامج LA ، قم بتشغيل مصدر طاقة الليزر واضبط أوقات التسخين والغسيل بالليزر. ابدأ تسلسل الليزر ، وتحقق من أن برنامج المقارنات الدولية - MS يبدأ بشكل صحيح في جمع البيانات بعد الاستئصال.

بمجرد جمع البيانات ، قم باستخراج بيانات المعايير من ملفات CSV. قم بإجراء طرح خط الأساس واستبعاد إشارة الخلفية. تحديد انخفاض الإشارة الناجم عن الثقوب في معايير الأنسجة.

قم بإخفاء مناطق الإشارة المنخفضة هذه ثم قم بتصدير البيانات كجدول بيانات. احسب عامل التحويل من CPS إلى PPM لكل عنصر محدد. كرر هذه العملية لكل معيار.

بعد ذلك ، افتح برنامج إنشاء الصور الكمي واستورد عينة البيانات من ملفات CSV. حدد عدة مناطق من الخلفية لتطبيق تصحيح الخلفية. حدد أداة تحرير الرسم البياني ، وانقر بزر الماوس الأيمن فوق الصورة ، وحدد تعديل مظهر الصورة. قم بتغيير اللون الأول عند Z إلى قيمة سالبة كبيرة.

وانقر فوق تم لتحسين إشارة الخلفية. ثم في علامة التبويب المعايير، أدخل عوامل تصحيح CPS PPM لكل معيار وانقر فوق انتقال. افتح متصفح البيانات في علامة التبويب البيانات ، وانقر بزر الماوس الأيمن على ملف صورة مصحح ، وانقر فوق صورة جديدة.

افتح نافذة تعديل مظهر الصورة وقم بتعيين جدول الألوان والمقياس. استخدم الأداة المساعدة Add Annotation لوضع مقياس ألوان على الصورة. اضبط مقياس الألوان في نافذة مقياس الألوان. بمجرد تلوين الصورة والتعليق عليها ، إما أن تنسخ الصورة وتلصقها في برنامج آخر أو تصديرها من برنامج إنشاء الصور.

لتنشيط أدوات عائد الاستثمار، حدد معالجة الصور من حزم التحليل واختر صورة. في علامة التبويب صورة، انقر فوق عائد الاستثمار وابدأ سحب عائد الاستثمار. حدد منطقة الاهتمام ثم انقر فوق إنهاء عائد الاستثمار.

في علامة التبويب صورة، انقر فوق الإحصائيات للحصول على بيانات عائد الاستثمار. انسخ البيانات والصقها في جدول بيانات، مع التأكد من حفظها عند إضافة كل عائد استثمار. كرر العملية حسب الحاجة.