JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:40 د • June 17th, 2025
ابدأ بشريحة من أنسجة دماغ الفئران مثبتة على شريحة زجاجية ومغمورة في مخزن مؤقت.
يعاني الجرذ من اعتلال الأنابيب ، وهي حالة ناتجة عن عيوب في التوبولين ، اللبنات الأساسية للأنابيب الدقيقة ، مما يؤدي إلى تراكمها واضطرابها بشكل غير طبيعي.
يؤثر هذا أيضا على إنتاج المايلين في الجهاز العصبي المركزي.
ضع الشريحة تحت مجهر إثارة مغطى ثنائي الفوتون للتصوير التفصيلي.
رطب الشريحة بانتظام للحفاظ على سلامتها.
اضبط المجهر على وضع التصوير غير الممسوح ضوئيا، وهي تقنية خالية من الملصقات للكشف عن الإشارات الضعيفة.
تعريض الأنسجة لليزر الأشعة تحت الحمراء النبضي.
تنبعث الأنابيب الدقيقة من الضوء كإشارات قابلة للاكتشاف تعرف باسم الجيل التوافقي الثاني أو إشارات SHG.
تعمل المناطق ذات التراكم غير الطبيعي للأنابيب الدقيقة على تضخيم هذه الإشارات ، مما يزيد من قابليتها للكشف.
قم بتطبيق المرشحات الضوئية لتحسين هذه الإشارات.
تكشف الصورة الملتقطة عن كثافة الأنابيب الدقيقة والتشوهات ، حيث تشير كثافة SHG العالية والتجمع إلى عيوب التوبولين وانخفاض إنتاج المايلين.
ضع العينة تحت المجهر وضعها بشكل مناسب تحت الهدف عن طريق المراقبة المباشرة من خلال العينين ذات الضوء المنقول. قم بإزالة HBSS الزائد بحيث يغطي فيلم سائل رقيق العينة بأكملها. افحص الفيلم السائل بصريا كل بضع دقائق لتجنب التبخر المفرط وتجفيف العينة.
تحضير مرحلة المجهر للتصوير غير الممسوح ضوئيا، والذي يتضمن إغلاق جميع أبواب غرفة الحضانة المظلمة، أو تغطية غرفة الحضانة بقماش مطلي بالبولي يوريثين من النايلون الأسود. حدد وضع التصوير غير الممسوح ضوئيا على طول مسار الإرسال. بهذه الطريقة ، سيتم تحسين التقاط إشارة SH الضعيفة للتوبولين.
ثم حدد الهدف. بعد ذلك ، اضبط طاقة الليزر مع وقت سكون بكسل يبلغ 12.6 ميكروثانية. التقط صورا لا يزيد حجمها عن 512 × 512 بكسل ، بسرعة 5 ومتوسط 2 لمتوسط وقت اكتساب يبلغ 15 ثانية. التقط الصور أولا باستخدام مرشح تمرير قصير 485 نانومتر. وفي الخطوة الثانية ، أضف مرشح ممر نطاق حاد 405 نانومتر.