تصوير الخلايا باستخدام الفحص المجهري الفلوري للانعكاس الداخلي الكلي

ابدأ بإعداد مجهر فلوري الانعكاس الداخلي الكلي (TIRF) مع غرفة تصوير مغطاة تحتوي على غطاء زجاجي مع خلايا الورم الأرومي العصبي البشري الملتصقة في مخزن مؤقت.

تعبر هذه الخلايا عن الفلوروفورات الخاصة بأغشية الحويصلة المتشابكة.

في وضع التألق العرضي ، حدد خلية للتصوير.

في وضع TIRF ، من خلال الهدف ، قم بتوجيه الليزر إلى العينة ، ويظهر كبقعة على الغلاف.

اضبط الزاوية لتتجاوز الزاوية الحرجة عند الواجهة بين الغطاء الزجاجي عالي معامل الانكسار وعينة معامل الانكسار المنخفض، مما يتسبب في حدوث انعكاس داخلي كلي (TIR)، ينظر إليه على أنه خط رفيع.

يولد TIR موجة زائلة تثير الفلوروفورات على أقرب غشاء.

يتم جمع التألق المنبعث من الهدف ويتم التقاطها بواسطة الكاميرا.

قم بضبط صورة عالية التباين لغشاء الخلية بالقرب من الغطاء.

قم بتحسين إعدادات الاستحواذ لتقليل التبييض الضوئي وضبط تردد أخذ العينات.

ابدأ تصوير TIRF لتصور الحويصلات المشبكية المنصهرة.

في وضع التألق ، ركز على الغطاء ، واختر الخلايا المنقولة الموضوعة في مركز الغرفة. تحت التحكم في البرنامج ، قم بالتبديل إلى إضاءة العشب في الوضع المباشر. لضبط تكوين العشب ، تحقق من موضع الشعاع الذي يخرج من الهدف على غطاء العينة. عندما يتم وضع الشعاع في وسط العدسة الشيئية ، تظهر بقعة في وسط غطاء عينة العشب ، ويتم تصوير الخلية في وضع التألق.

للوصول إلى الزاوية الحرجة ، حرك البقعة ا