تثبيط النشاط العصبي واكتشافه باستخدام الفيزيولوجيا الكهربية في الفئران

ابدأ بفأر مخدر مؤمن في إطار تجسيمي مع جمجمته مكشوفة.

باستخدام المعالم التشريحية ، بريجما ولامدا ، حدد موقع القولون العلوي ، وهو هيكل دماغي عميق مسؤول عن معالجة المعلومات المرئية.

قم بالحفر لإنشاء سديلة عظمية ، وإزالتها ، وقم بتطبيق عازل للحفاظ على رطوبة الدماغ المكشوف.

ضع مجموعة حقن تتكون من ماصة دقيقة مع قطب كهربائي متصل بحقنة دقيقة.

تحتوي الماصة الدقيقة على محلول ناقل عصبي مثبط لقمع استثارة الخلايا العصبية بينما يسجل القطب الكهربائي نشاط الخلايا العصبية في نفس الوقت.

قم بخفض الحقن في القولون العلوي وقم بتغطية السطح المكشوف بالأجار المنصهر لمنع الجفاف.

يومض الضوء الحالي على العين لتحفيز الخلايا العصبية واستحضار إمكانات العمل المتزامنة.

حقن الناقل العصبي, الذي يرتبط بمستقبلاته ويؤدي إلى تدفق أيون الكلوريد.

يؤدي هذا التدفق إلى فرط استقطاب إمكانات الغشاء ، وبالتالي قمع إمكانات العمل.

مع انخفاض تركيز الناقل العصبي بمرور الوقت ، يتعافى النشاط العصبي.

لتحضير ماصات حقن التسجيل، اسحب أولا شعيرات دموية بقطر خارجي 1 ملليمتر. بالنسبة لنموذج شرطي رأسي 720 أو وحدة مماثلة ، اضبط السخان على 18 والملف اللولبي على واحد. بعد ذلك ، عند ارتداء القفازات ، قم بكسر الطرف يدويا لعمل فتحة والتحقق تحت المجهر من أن القطر الداخلي يتراوح بين 30 و 40 ميكرومتر. قم بقياس ذلك باستخدام مسطرة معين المنظر. سينتج مقاومة منخفضة نسبيا من 0.3 إلى 0.6 ميغا أوم.

ثم من الطرف غير المدبب ، أدخل سلكا فضيا في الماصة بطول حوالي 7 سم ، واترك 1 إلى 2 سم معلقة من الماصة. ثني هذا السلك الزائد بشكل متعامد إلى الشعيرات الدموية. بعد ذلك ، خذ إبرة تحت الجلد بقياس 30 وقم بتطبيق مادة لاصقة بلاستيكية مرنة على العمود. ثم أدخل الإبرة ببطء في الماصة قدر الإمكان.

أضف المزيد من المادة اللاصقة لإنشاء مانع تسرب عند التقاطع بين الماصة والإبرة. مع رفع طرف الماصة لأعلى، اترك المجموعة تجف لمدة 12 ساعة تقريبا. بعد التخدير ووضع الفئران في إطار تجسيمي ، ضع مرهما للعيون ، احلق رأسه نظيفا.

بعد وضع مخدر موضعي وتأكيد خطة جراحية للتخدير ، استمر في شق فروة الرأس على طول الوسيط باستخدام شفرة مشرط رقم 10. سيؤدي ذلك إلى كشف الغرز الإكليلية والسهمية. بعد ذلك ، باستخدام ملعقة جراحية ، حدد المراجع التشريحية لامدا وبريجما.

اضبط موضع الرأس بحيث تكون هذه المعالم مستوية في نفس المستوى الأفقي. ثم صفر مؤشر صلب دقيق مثل أنبوب زجاجي على البريجما. بعد ذلك ، اضبط موضع الأنبوب على موقع الاهتمام باستخدام إحداثيات من البريجما.

استخدم Sharpie لرسم مربع حول المنطقة المستهدفة لبضع القحف. الآن ، مع المثقاب المعقم الجراحي ، قم بإزالة العظم ببطء على طول العلامات. ابدأ باستخدام أقل قدر ممكن من الضغط واستمر في تحريك المثقاب لتجنب تلف الأنسجة الناجم عن الرأس بسبب الاحتكاك.

عندما يصبح العظم رقيقا ، قم بإزالة القسم المربع بعناية باستخدام الملقط. لا تحتاج الأم الجافية إلى إزالتها لأن قضيب الحقن سوف يخترقها. من الآن فصاعدا ، حافظ على القشرة المكشوفة مروية بالسائل النخاعي. قم بإعداد الحقن عن طريق ملء حقنة من 5 إلى 10 ميكرولتر بالزيت المعدني. بعد ذلك ، قم بإعداد الدواء المعني بصبغة في محلول ملحي فسيولوجي. هنا ، يتم خلط 0.5٪ Chicago Sky Blue مع 300 ميكرومولار GABA.

الآن ، املأ ماصة الحقن عن طريق تحميل حقنة سعة 1 ملليلتر بالمحلول المحضر أولا ، ثم استخدام المحقنة لتحميل الماصة. عند إزالة المحقنة ، حافظ على الضغط الخفيف على المكبس ، حتى لا يزيل الفراغ المحلول من الحقن. تحقق من تسرب السوائل عند نقاط التسرب المحتملة. امسح أي سوائل زائدة وأعد التحقق من عدم وجود تسرب.

الآن قم بإرفاق المحقنة الصغيرة بالزيت المعدني بالحقن. ثم امسح أي محلول زائد بالشاش. تحقق من طرف الحقن. يجب أن يكون من الممكن تدفق قطرات صغيرة من المحلول من خلاله. خلاف ذلك ، يتم حظره أو تسريبه. الآن ، قم بتركيب الحاقن بإحكام على نظام المضخة الصغيرة. ثم حرك موضع الحقن إلى إحداثيات الهدف ، وقم بخفض القطب الكهربائي إلى القولون العلوي ، والذي يمكن تحديده من خلال تسجيل الإمكانات المرئية المستحثة.

أثناء خفض القطب ، قم بتطبيق ضغط إيجابي صغير عن طريق تطبيق معدل منخفض من الحقن لتجنب الانسداد. مقاطعة الحقن عند الوصول إلى الهيكل. بعد إدخال الحقن ، قم بتغطية القشرة المكشوفة بأجار دافئ لمنع الجفاف.

بعد التثبيت النهائي للقطب ، انتظر 30 دقيقة للسماح بتثبيت الأنسجة المحيطة بالقطب. ثم حقن 400 إلى 800 نانولتر من المحلول بمعدل 40 نانولتر في الدقيقة ، حتى تعطيل النشاط العصبي في القولون العلوي. يجب أن يظهر القطب انخفاضا في المسامير أثناء حقن المحلول المثبط.