توصيل الجينات تحت الظهر في الحبل الشوكي للفأر لتقييم التعبير الجيني

خذ فأرا مخدرا واحلق ظهره وقم بتطهير الجلد.

شق الجلد ، وفصل العضلات عن الفقرات ، وسحبها باستخدام المشابك.

احفر في الصفيحة الفقرية لإحداث تشققات ، ثم قم بإزالة شظايا العظام لكشف الأم الجافية ، غشاء الحبل الشوكي الخارجي.

باستخدام إبرة ، قم بإنشاء فتحة جافية وثقب الأم الأساسية لدخول المساحة السفلية للوصول المباشر إلى أنسجة العمود الفقري.

خذ إبرة توصيل تحتوي على معلق من الفيروس المؤتلف المرتبط بالغدة يحمل جينا يعبر عن البروتين الفلوري وحقن المعلق.

اسحب الإبرة ، وخياطة العضلات والجلد ، واسمح للفأر بالتعافي.

يرتبط الفيروس بالمستقبلات الموجودة على الخلايا العصبية والخلايا الدبقية ويتم خلطته الخلوية.

بمجرد دخوله إلى النواة ، يحفز الفيروس التعبير الجيني لإنتاج بروتينات الفلورسنت.

نموذج توصيل الجينات تحت الظهر جاهز الآن لتقييم التعبير الجيني المستهدف في الحبل الشوكي.

ابدأ بتخدير بشكل صحيح لإجراء الجراحة. يستخدم إيزوفلوران هنا. تأكد من عدم وجود استجابة قرصة مخلب قبل المتابعة. ثم غطي العينين بمرهم للعيون. بعد ذلك ، احلق ظهر باستخدام المقصات ، ونظف الجلد باستخدام 2٪ كلورهيكسيدين.

إذا كان سيتم إجراء الحقن تحت الظهر القطني ، فقم بقص الجلد الذي يغطي الفقرات T8 إلى L1 بمشرط. ثم استخدم المقص لفصل العضلة الفقرية من الفقرات الشوكية T10 إلى T12. قم بتركيب في إطار تجسيمي قياسي باستخدام مشابك العمود الفقري للفأر.