مراقبة التعبير الجيني في الوقت الحقيقي في شرائح الدماغ عبر التصوير ثلاثي الأبعاد

ابدأ بطبق يحتوي على شرائح الدماغ القشرية من أجنة الفئران المعدلة وراثيا في وسائط مكملة باللوسيفيرين.

تحتوي المنطقة القشرية على خلايا جذعية عصبية تعبر عن بروتينات الفلورسنت الخضراء أو GFPs وجين ذي أهمية مدمج في جين مراسل لوسيفيراز.

ضع الطبق على مرحلة المجهر لقياسات التألق والإضاءة.

التقط صورا اختبارية لمضان GFP ، مع التركيز على مناطق الاهتمام.

أثناء التمايز العصبي ، تبدأ الخلايا الجذعية في التعبير عن الجين محل الاهتمام وإنتاج بروتينات مدمجة مع إنزيم لوسيفيراز.

يتفاعل اللوسيفيرين مع إنزيمات لوسيفيراز ، مما يولد تلألؤا بيولوجيا يعكس بشكل مباشر التعبير عن الجين محل الاهتمام أثناء التمايز.

التقط صورة مضان لتحديد مناطق معينة من النشاط ، وصورة تلألؤ بيولوجي لمراقبة التعبير الجيني الديناميكي وصورة المجال الساطع لتوفير المعلومات المورفولوجية.

احصل على هذه الصور ثلاثية الأبعاد ذات الفاصل الزمني لتصور التعبير الجيني أثناء التمايز العصبي داخل بيئة الأنسجة الأصلية.

لتصور تعبير مراسل luciferase داخل ثقافات الشرائح، حدد الهدف 40x. ووضع طبق العينة على مرحلة المجهر. الحصول على صورة اختبار للتألق. وقم بتعيين الموضع ومستوى التركيز على المنطقة ذات الاهتمام تحت إضاءة ضوء الإثارة المناسب. ثم قم بتشغيل اكتساب الفاصل الزمني عن طريق الاستحواذ ثلاثي الأبعاد ، والتألق ، والحقل الساطع لمدة 24 ساعة.