تغليف عامل نمو الأعصاب في الجسيمات النانوية عالية الكثافة التي تحاكي البروتين الدهني

خذ أنبوب طرد مركزي دقيق يحتوي على عامل نمو الأعصاب أو NGF ، وهو بروتين عصبي التغذية ، والبروتامين ، وهو بروتين ناقل موجب الشحنة.

مجمعات البروتامين مع NGF عبر التفاعلات الكهروستاتيكية التي تسهل التغليف وتمنع التدهور.

إلى قارورة زجاجية ، أضف الإيثانول الذي يحتوي على سواغات دهنية تحاكي التركيب الدهني للبروتينات الدهنية عالية الكثافة أو HDL لتكوين الجسيمات النانوية.

تخلط مع الإيثانول الإضافي لتشتت موحد. تبخر الإيثانول تحت النيتروجين لتشكيل طبقة دهنية رقيقة.

أضف الماء فائق النقاء وتجانسه بسرعة عالية للسماح بالتجميع الذاتي في الجسيمات النانوية الأولية التي تحاكي HDL.

أدخل مركب NGF-protamine في الجسيمات النانوية واحتضانها أثناء التحريك لتعزيز تغليف البروتامين NGF مع الحفاظ على نشاطها الحيوي.

قم بتبريد المعلق لتثبيت الجسيمات النانوية ، ثم أضف صميم البروتين الشحمي A-I ، البروتين الهيكلي الأساسي ل HDL ، واستمر في التقليب لدمج البروتين في بنية الجسيمات النانوية.

هذه الجسيمات النانوية التي تحاكي HDL المحملة ب NGF جاهزة الآن لمزيد من الدراسات.

للبدء ، امزج 10 ميكرولتر من NGF مع 10 ميكرولتر من البروتامين USP في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مليلتر ، واتركه يقف لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل المجمع. بعد ذلك ، أضف 59 ميكرولترا من الفوسفاتيديل كولين و 11 ميكرولترا من السفينجوميلين إلى قارورة زجاجية.

أضف أيضا 4 ميكرولترات من الفوسفاتيديل سيرين ، و 15 ميكرولتر من أوليات الكوليسترول ، و 45 ميكرولتر من توكوفيريل بولي إيثيلين جلايكول سكسينات. امزج الإيثانول وتبخره تحت تيار نيتروجين لطيف لمدة خمس دقائق تقريبا. يجب أن تشكل جميع السواغ طبقة زيتية رقيقة في الجزء السفلي من القارورة الزجاجية.

أضف 1 مليلتر من الماء فائق النقاء إلى القارورة ، وقم بتجانس عند 9,500 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة لتشكيل النموذج الأولي للجسيمات النانوية أو NPs. ثم أضف المركب المحضر إلى النموذج الأولي NPs. احتضن التعليق عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة ، مع التحريك ، باستخدام قضيب تقليب صغير في القارورة الزجاجية.

قم بتبريد أعضاء البرلمان عن طريق التقليب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة أخرى. بعد التبريد ، أضف 106 ميكرولتر من صميم البروتين الشحمي A-I وحركها في درجة حرارة الغرفة طوال الليل لتشكيل NGF HDL النهائي الذي يحاكي NPs.