الحقن الفيروسي التجسيمي لتحرير الجينات العصبية المستهدفة في دماغ الفأر

قم بتأمين ماوس مخدر في إطار تجسيم.

قم بتطهير فروة الرأس المحلوقة ، ثم قم بعمل شق خط الوسط لكشف الجمجمة.

جفف الجمجمة واستخدم بيروكسيد الهيدروجين لتعزيز رؤية بريجما.

حدد موقع bregma و lambda ، ثم حدد المواقع المستهدفة.

حفر بعناية من خلال الجمجمة في المواقع المستهدفة.

قم بتوصيل المحقنة المملوءة بالفيروسات بالأداة التجسيمية.

يقوم الفيروس بتشفير Cas9 والحمض النووي الريبي أحادي الدليل لتحرير الجينوم في الخلايا العصبية التلفيف المسننة ، جنبا إلى جنب مع مراسل الفلورسنت لتسمية الخلايا العصبية المصابة.

اخفض المحقنة للوصول إلى التلفيف المسنن ، ثم حقن الفيروس ببطء لضمان التوزيع المنتظم.

ارفع المحقنة تدريجيا وكرر الحقن بإحداثيات إضافية.

توقف مؤقتا لفترة وجيزة لمنع التدفق العكسي ، ثم اسحب الإبرة ببطء.

كرر الإجراء على نصف الكرة المعاكس.

أخيرا ، قم بخياطة الشق.

النموذج جاهز الآن لمزيد من الدراسات.

حلق رأس الفأر المخدر من أجل التحضير لموقع الحقن. مباشرة 4٪ أيزوفلوران في مخروط الأنف. بعد ذلك ، ضع الماوس في أداة التجسيم. أدخل قضيب العضة في فمه حتى تسقط أسنانه في الفتحة قبل تثبيت قضبان الأذن.

تأكد من أن جسم على وسادة التدفئة وأن الأنف يقع في مخروط الأنف. بعد ذلك ، قم بتأكيد التخدير عن طريق إعطاء قرصة في القدم. ثم ضع دموعا اصطناعية لتليين العينين. بعد ذلك ، قم بمسح الرأس المحلوق باليود والليدوكائين.

الآن ، قم بعمل ش