تصور الشبكات العصبية والأوعية الدموية في جنين الدجاج

ابدأ ببيضة دجاج مخصبة ذات نوافذ تحتوي على جنين في مرحلة مبكرة مع استئصال الأنبوب العصبي عند مستوى الجسيدات من واحد إلى سبعة.

خذ أنبوبا عصبيا من متبرع يحمل علامة GFP من جنين دجاج معدل وراثيا متطابق مع المرحلة وزرعه في المتلقي ، مما يضمن التوجيه التشريحي المناسب.

قم بإزالة السائل الزائد حول الكسب غير المشروع لتعزيز الالتصاق بين المتبرع والأنسجة المضيفة.

أغلق النافذة بشريط شفاف لمنع الجفاف والتلوث.

احتضان البويضة حتى يتطور الجنين إلى المرحلة المرغوبة.

قم بإزالة الشريط.

حدد الوريد الزجاجي على صفار البيض الذي يحمل الدم نحو الجنين وقم بإزالة الغشاء الزجاجي العلوي.

باستخدام إبرة زجاجية ، قم بحقن صبغة فلورية محبة للدهون في الوريد بثبات.

تصور الجنين تحت المجهر التجسيم.

ترتبط الصبغة المحقونة بالخلايا البطانية المبطنة للأوعية الدموية ، مما يسلط الضوء على شبكة الأوعية الدموية ، بينما يتيح الأنبوب العصبي المسمى GFP تتبع الشبكة العصبية.

عندما تكون جاهزا لبدء إجراء التطعيم ، انقل الأنبوب العصبي المقطوع بعناية من زجاج الساعة إلى الجنين المضيف. ضع الأنبوب العصبي في الاتجاه الصحيح. وادفع المصنع المجاور برفق إلى المنطقة المستقطأة. إذا لزم الأمر ، استخدم المشرط الدقيق لتقليم المصباح المخرج إلى الحجم الدقيق للمنطقة المستقاصة.

بمجرد الوصول إلى الموضع الصحيح ، قم بإزالة PBS والسوائل الأخرى لمساعدة المتبرع والأنسجة المضيفة على الالتصاق وإنشاء الكسب غير المشروع. يمكن تقييم التكامل الناجح للأنبوب العصبي الإيجابي GFP المطعمة في مضيف الدجاج من النوع البري تحت المجهر الفلوري. أغلق النافذة بأكملها بشريط شفاف بعرض 24 ملم لمنع الجفاف والتلوث.

قم بتسمية الجنين الخيمري. وأعد البيضة إلى الحاضنة لمزيد من التطوير.

في النقطة الزمنية التجريبية المطلوبة ، استرجع البيضة من الحاضنة. وقم بإزالة الشريط الشفاف للوصول إلى الجنين. بمجرد رؤيته ، حدد موقع الوريد الذي يمكن الوصول إليه على صفار البيض ، وتأكد من توجيه تدفق الدم نحو الجنين.

اختر نقطة متفرعة على أحد الأوردة vitelline لموقع الحقن. استخدم الملقط لإزالة غشاء vitelline فوق نقطة الحقن المختارة عن طريق التمزق في اتجاهين متعاكسين. بعد ذلك ، اضبط قطر الإبرة الزجاجية المسحوبة على حجم الوريد.

قم بتحميل الإبرة ب 5 إلى 10 ميكرولتر من محلول DiI. أدخل الإبرة بسرعة في الوريد. وانفخ بثبات بأنبوب الفم للسماح ل DiI بالانضمام إلى تدفق الدم ببطء دون تكوين جلطة. يمكن تقييم نجاح حقن DiI من خلال عرض الجنين بإيجاز تحت المجهر الفلوري.