التصوير في الوقت الحقيقي في المختبر للتفرع المحوري في الخلايا العصبية القشرية للفأر

خذ طبق تصوير ذو قاع زجاجي يحتوي على الخلايا العصبية القشرية الجنينية للفأر.

ضع الطبق داخل الغرفة البيئية لمجهر تباين التداخل التفاضلي ، أو DIC ، للحفاظ على بقاء الخلية أثناء التصوير.

يقسم الفحص المجهري DIC الضوء المستقطب إلى شعاعين يعبران العينة.

تؤدي

الاختلافات في معامل الانكسار عبر العينة إلى حدوث تحولات في الطور بين هذه الحزم.

عندما تتحد الحزم ، يولد تداخلها صورة عالية التباين ، مما يجعل الهياكل الخلوية الدقيقة مرئية.

تحديد الخلايا العصبية ذات المحاور غير المتفرعة واستخدام التصوير بفاصل زمني لتصور التفرع المحوري.

عالج بالنيترين 1 ، وهو إشارة توجيه خارج الخلية ترتبط بالمستقبلات المحورية وتؤدي إلى إفراز الخلايا الموضعية.

تقوم

الحويصلات الخارجية بتوصيل مكونات الغشاء إلى المواقع بينما يتم إعادة تنظيم الهيكل الخلوي لدعم تمدد الغشاء.

تحت المجهر ، تظهر هذه التغييرات على شكل نتوءات صغيرة ، مما يشير إلى بداية التفرع المحوري.

بمرور الوقت ، تتطور هذه النتوءات إلى فروع محورية ناضجة ، مما يوضح العملية الديناميكية لتطور الخلايا العصبية.

في غضون يومين في المختبر ، ضع طبق التصوير السفلي الزجاجي الذي يحتوي على خلايا عصبية غير منقولة في غرفة بيئية رطبة دافئة مسبقا. استخدم مجهرا مزودا بنظام 60x ، و 1.4 NA ، وعدسة موضوعية DIC ، ومكثف فتحة رقمية عالية للحصول على أفضل جودة ودقة للصورة. بعد ذلك ، مع إضاءة الضو