تقييم العلاج بالبلازما بالضغط الجوي في خلايا الورم الأرومي العصبي المحروم من الجلوكوز

خذ مزرعة خلايا الورم الأرومي العصبي في صفيحة متعددة الآبار مع الوسائط.

استبدل الوسائط الموجودة في الآبار بوسائط عصبية خالية من الجلوكوز للحث على الإجهاد التأكسدي.

ضع اللوحة أسفل فوهة البلازما النفاثة على مسافة مثالية للتعرض المنتظم.

عالج الآبار المختارة بجرعة منخفضة من نفاثة البلازما ذات الضغط الجوي القائمة على الهيليوم (APPJ) ، والتي تولد مستويات خاضعة للرقابة من أنواع الأكسجين والنيتروجين التفاعلية.

احتضان الخلايا للسماح بتنشيط مسارات الاستجابة للإجهاد وتنظيم الإنزيمات المضادة للأكسدة في الآبار المعالجة ب APPJ.

تتعرض الخلايا في الآبار غير المعالجة تحت الحرمان من الجلوكوز لمزيد من الضرر الخلوي التأكسدي.

أضف كاشف مقايسة قابلية الخلية واحتضنها. تقلل الخلايا القابلة للحياة من الكاشف إلى منتج ملون.

قم بقياس كثافة اللون باستخدام قارئ الألواح الدقيقة.

تظهر

الآبار المعالجة ب APPJ كثافة لونية متزايدة بسبب قابلية الخلايا العالية للحياة ، بينما تظهر الآبار غير المعالجة كثافة أقل ، مما يؤكد التأثير الوقائي العصبي ل APPJ تحت الحرمان من الجلوكوز.

اضبط المسافة بين فوهة أنبوب الكوارتز والمنصة حيث سيتم وضع لوحة البئر 96 إلى ثلاثة سنتيمترات للتأكد من أن الشعاع يمكن أن يلمس سطح وسط الثقافة. قبل العلاج ، قم بتغيير وسط المزرعة في كل بئر إلى RPMI 1640 بدون وسط الجلوكوز. الآن ، ضع اللوحة تحت فوهة نفاثة البلازما ذات الضغط الجوي. ثم عالج الخلايا في آبار منفصلة لمدة 0 و 1 و 2 و 4 و 8 و 12 ثانية.

بعد العلاج ، احتضان الخلايا لمدة ساعة واحدة في حاضنة خلوية عند 37 درجة مئوية ، بعد الحضانة عند 10 ميكرولتر من محلول Cell Counting Kit 8 لكل بئر. ثم احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة أربع ساعات. أخيرا ، قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة.