التصوير في الجسم الحي لاستجابات الخلايا العصبية العقدية الركنية باستخدام الفحص المجهري epifluorescent

ابدأ بفأر مخدر مع عقدة ركبية مكشوفة جراحيا ، وهي مجموعة من الخلايا العصبية الطرفية لمعالجة التذوق.

تعبر هذه الخلايا العصبية عن GCaMP ، وهو مؤشر كالسيوم يتألق عند ارتباط الكالسيوم.

قم بإزالة أي سائل يغطي العقدة للحصول على تصور واضح.

ضع الماوس على وسادة ماصة تحت المجهر وحدد موقع العقدة الركبية باستخدام المعالم التشريحية.

باستخدام مرشح مناسب على نطاق التألق ، اكتشف التألق الأخضر من الخلايا العصبية التي تعبر عن GCaMP.

بعد ذلك ، أدخل إبرة توزيع متصلة بأنبوب توصيل الطعم في فم الماوس وقم بتوصيل الطعم.

يحفز الطعم خلايا مستقبلات التذوق ، ويطلق ATP ، الذي يرتبط بمستقبلات الخلايا العصبية العقدية ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم.

ترتبط أيونات الكالسيوم هذه ب GCaMPs ، مما يؤدي إلى انبعاث التألق.

قم بمحاذاة الكاميرا مع مجال رؤية المجهر ومزامنة تسجيل الفيديو مع التوصيل السريع لالتقاط النشاط العصبي في الوقت الفعلي من خلال تغيرات التألق.

لتشغيل لوحة التقطيع ، استخدم الشفط لإزالة السائل من فوق الركبات ووضع الماوس على وسادة ماصة تحت مجهر تشريح. استخدم الثقب المتبقي في الفقاعات ، والثقب الموجود في العظم الصدغي ، والعصب السابع لتحديد موقع العقدة الركانية. واستخدم مرشح FITC / GFP على نطاق التألق للتحقق من الخلايا العصبية العقدية الفردية التي تعبر عن GCaMP. ضع إبرة الاستغناء عن خط واحد بقوة في فم. قم بمزامنة بداية تسجيل الفيديو مع بداية العرض التقديمي الأنيق ، ومشاهدة البث المباشر للردود.