عزل وتنقية البروتينات السكرية قليلة التغصن المؤتلفة

0 مشاهدات3:59 د • August 7th, 2025

MOGtag هو بروتين سكري مؤتلف من خلايا المايلين قليلة التغصن مدمج مع علامات الذوبان والتنقية للدراسات التجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي.

لعزل MOGtag ، قم بتعليق الخلايا البكتيرية التي تعبر عن MOGtag في مخزن مؤقت للتحلل واحتضانه.

تعمل

الإنزيمات والمنظفات الموجودة في المخزن المؤقت على تعطيل دهون الغشاء وتدهور جدار الخلية.

Sonicate لتحلل الخلايا بشكل أكبر ، وإطلاق أجسام شمولية غير قابلة للذوبان تحتوي على MOGtag.

جهاز طرد مركزي لحبيبات أجسام التضمين. تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت ، واحتضنها.

أضف غوانيدين هيدروكلوريد ، ثم احتضن لإذابة MOGtag.

انقل البروتينات القابلة للذوبان إلى راتنج النيكل المشحون ، واخلطها واحتضانها مع الاهتزاز للسماح ل MOGtag بالارتباط بأيونات النيكل.

جهاز طرد مركزي لحبيبات MOGtag المقيد. قم بإزالة المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت للشطف ، واحتضانها بالرج.

يقوم Imidazole في المخزن المؤقت للشطف بإطلاق MOGtag من الراتنج.

جهاز الطرد المركزي مرة أخرى ، اجمع المادة الطافية المنقاة المحتوية على MOGtag ، وقم بتخزينها لمزيد من التحليل.

قم بتوزيع الثقافات بالتساوي بين زجاجات سعة 250 مليلتر متوافقة مع أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة ، واحتفظ بالزجاجات على الجليد من هذه النقطة فصاعدا. حبيبات الخلايا البكتيرية عند 22,000 * جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. قم بتعليق ودمج جميع الكريات البكتيرية في ما مجموعه 30 مل من المخزن المؤقت للتحلل. انقل هذا الحجم إلى أنبوب دائري القاع سعة 50 مليلتر قادر على الطرد المركزي عالي السرعة.

ضع هذا الأنبوب في حمام مائي 30 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. خلال وقت الحضانة ، رج الأنبوب مرتين لإعادة تعليق الخلايا. بعد الحضانة ، انقل الأنبوب إلى الجليد وصوتنة المحلول عند 20 كيلو هرتز والسعة 70٪ ، والنبض لمدة ثلاث ثوان وإيقاف التشغيل لمدة ثلاث ثوان لمدة 5 نبضات. قم بتوصيل المحلول لست جولات إجمالية من خمس نبضات ، مما يسمح للمحلول بالتبريد على الجليد بين الجولات.

بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للمحلول عند 24,000 * جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، ثم أعد تعليق الحبيبات في 30 مل من المخزن المؤقت A واحتضان المحلول عند 4 درجات مئوية لمدة ثلاث ساعات. ثم أضف 17.2 جراما من جوانيدين حمض الهيدروكلوريك إلى المحلول. احتضان العينة على الثلج لمدة ساعة واحدة لإذابة بروتين علامة MOV. لتنقية بروتين علامة MOG ، انقل الحجم الكامل للبروتين المذاب إلى الأنبوب الأول الذي يحتوي على راتنج النيكل. بعد الخلط ، ضع الأنبوب أفقيا على كرسي هزاز عند 4 درجات مئوية لمدة ساعة واحدة.

بعد الطرد المركزي للأنبوب عند 4,500 * جم لمدة ثماني دقائق عند 4 درجات مئوية ، انقل المادة الطافية إلى الأنبوب الثاني من راتنج النيكل واحتضانها كما كان من قبل. في غضون ذلك ، قم بإعادة تعليق راتنج النيكل في الأنبوب الأول في 40 مل من محلول الشطف وضع الأنبوب أفقيا على هزاز عند 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق قبل الطرد المركزي كما كان من قبل. انقل المادة الطافية التي تحتوي على بروتين علامة MOG المملوءة إلى زجاجة سعة 250 مليلتر تحمل علامة MOG المنقى. احتفظ بهذه الزجاجة على حرارة 4 درجات مئوية.

11:11

التحضير للثقافات الجرذ دبقية قليلة التغصن السلف والكمي لOligodendrogenesis عن طريق ثنائي الأشعة تحت الحمراء الضوئي الإسفار

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:32

عزل إيمونوماجنيتيك سريعة ومحددة من الماوس Oligodendrocytes الأولية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:05

جيل من Oligodendrocytes وOligodendrocyte- متوسطة مكيفة للتجارب الثقافة المشتركة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:48

عزل الخلايا الدبقية الصغيرة عن قشرة دماغ الفأر البالغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:39

عزل واستزراع الخلايا السليفة قليلة التغصن من قشرة دماغ جرو الفأر

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:06

عزل الخلايا قليلة التغصن الأولية في الفئران باستخدام الخرز المناعي المغناطيسي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:00

إنتاج واستخدام الفيروسة البطيئة إلى خلايا انتقائي تنبيغ الابتدائية دبقية قليلة التغصن السلائف ل في المختبر فحوصات تكون الميالين

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:47

إنتاج بسيطة وفعالة وتنقية ماوس المايلين دبقية قليلة التغصن البروتين السكري لالتجريبية المناعة الذاتية الدراسات التهاب الدماغ

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:00

تشريح وعزل الفئران الدبقية من مناطق الجهاز العصبي المركزي المتعددة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:49

العزل المتزامن لأنواع الخلايا المقيمة في الجهاز العصبي المركزي الرئيسي من الفئران المصابة بالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي للبالغين

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 29 أغسطس 2026