JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:59 د • August 7th, 2025
MOGtag هو بروتين سكري مؤتلف من خلايا المايلين قليلة التغصن مدمج مع علامات الذوبان والتنقية للدراسات التجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي.
لعزل MOGtag ، قم بتعليق الخلايا البكتيرية التي تعبر عن MOGtag في مخزن مؤقت للتحلل واحتضانه.
تعملالإنزيمات والمنظفات الموجودة في المخزن المؤقت على تعطيل دهون الغشاء وتدهور جدار الخلية.
Sonicate لتحلل الخلايا بشكل أكبر ، وإطلاق أجسام شمولية غير قابلة للذوبان تحتوي على MOGtag.
جهاز طرد مركزي لحبيبات أجسام التضمين. تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت ، واحتضنها.
أضف غوانيدين هيدروكلوريد ، ثم احتضن لإذابة MOGtag.
انقل البروتينات القابلة للذوبان إلى راتنج النيكل المشحون ، واخلطها واحتضانها مع الاهتزاز للسماح ل MOGtag بالارتباط بأيونات النيكل.
جهاز طرد مركزي لحبيبات MOGtag المقيد. قم بإزالة المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت للشطف ، واحتضانها بالرج.
يقوم Imidazole في المخزن المؤقت للشطف بإطلاق MOGtag من الراتنج.
جهاز الطرد المركزي مرة أخرى ، اجمع المادة الطافية المنقاة المحتوية على MOGtag ، وقم بتخزينها لمزيد من التحليل.
قم بتوزيع الثقافات بالتساوي بين زجاجات سعة 250 مليلتر متوافقة مع أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة ، واحتفظ بالزجاجات على الجليد من هذه النقطة فصاعدا. حبيبات الخلايا البكتيرية عند 22,000 * جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. قم بتعليق ودمج جميع الكريات البكتيرية في ما مجموعه 30 مل من المخزن المؤقت للتحلل. انقل هذا الحجم إلى أنبوب دائري القاع سعة 50 مليلتر قادر على الطرد المركزي عالي السرعة.
ضع هذا الأنبوب في حمام مائي 30 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. خلال وقت الحضانة ، رج الأنبوب مرتين لإعادة تعليق الخلايا. بعد الحضانة ، انقل الأنبوب إلى الجليد وصوتنة المحلول عند 20 كيلو هرتز والسعة 70٪ ، والنبض لمدة ثلاث ثوان وإيقاف التشغيل لمدة ثلاث ثوان لمدة 5 نبضات. قم بتوصيل المحلول لست جولات إجمالية من خمس نبضات ، مما يسمح للمحلول بالتبريد على الجليد بين الجولات.
بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للمحلول عند 24,000 * جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، ثم أعد تعليق الحبيبات في 30 مل من المخزن المؤقت A واحتضان المحلول عند 4 درجات مئوية لمدة ثلاث ساعات. ثم أضف 17.2 جراما من جوانيدين حمض الهيدروكلوريك إلى المحلول. احتضان العينة على الثلج لمدة ساعة واحدة لإذابة بروتين علامة MOV. لتنقية بروتين علامة MOG ، انقل الحجم الكامل للبروتين المذاب إلى الأنبوب الأول الذي يحتوي على راتنج النيكل. بعد الخلط ، ضع الأنبوب أفقيا على كرسي هزاز عند 4 درجات مئوية لمدة ساعة واحدة.
بعد الطرد المركزي للأنبوب عند 4,500 * جم لمدة ثماني دقائق عند 4 درجات مئوية ، انقل المادة الطافية إلى الأنبوب الثاني من راتنج النيكل واحتضانها كما كان من قبل. في غضون ذلك ، قم بإعادة تعليق راتنج النيكل في الأنبوب الأول في 40 مل من محلول الشطف وضع الأنبوب أفقيا على هزاز عند 4 درجات مئوية لمدة خمس دقائق قبل الطرد المركزي كما كان من قبل. انقل المادة الطافية التي تحتوي على بروتين علامة MOG المملوءة إلى زجاجة سعة 250 مليلتر تحمل علامة MOG المنقى. احتفظ بهذه الزجاجة على حرارة 4 درجات مئوية.
يفصل هذا المقال عملية تنقية MOGtag، وهو بروتين سكري قليلة التغصن الميالينية المؤتلف، والضروري لدراسات التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي. تتضمن المنهجية تقنيات التحلل البكتيري، والإذابة، والتنقية لعزل MOGtag من أجل إجراء المزيد من التحاليل.
تتيح تنقية MOGtag المؤتلف إنتاجاً معيارياً للمستضدات ذات الصلة بالأمراض لأبحاث إزالة الميالين في المناعة الذاتية. ويدعم الوصول الموثوق إلى MOGtag المنقى تقليل المخاطر الآلية والتحقق من الأهداف في النماذج قبل السريرية للتصلب المتعدد. وتعزز هذه القدرة الاستمرارية الانتقالية بدءاً من مرحلة الاكتشاف وصولاً إلى التحقق في الجسم الحي ضمن مسارات البيولوجيا العصبية للمناعة الذاتية.
يدمج بروتوكول تنقية MOGtag في الواجهة الفاصلة بين إنتاج المستضد وتطوير النماذج قبل السريرية، مما يدعم سير العمل بدءاً من الاكتشاف المبكر وصولاً إلى التحقق الانتقالي.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026