عزل وتنقية البروتينات السكرية قليلة التغصن المؤتلفة

MOGtag هو بروتين سكري مؤتلف من خلايا المايلين قليلة التغصن مدمج مع علامات الذوبان والتنقية للدراسات التجريبية لالتهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي.

لعزل MOGtag ، قم بتعليق الخلايا البكتيرية التي تعبر عن MOGtag في مخزن مؤقت للتحلل واحتضانه.

تعمل

الإنزيمات والمنظفات الموجودة في المخزن المؤقت على تعطيل دهون الغشاء وتدهور جدار الخلية.

Sonicate لتحلل الخلايا بشكل أكبر ، وإطلاق أجسام شمولية غير قابلة للذوبان تحتوي على MOGtag.

جهاز طرد مركزي لحبيبات أجسام التضمين. تخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت ، واحتضنها.

أضف غوانيدين هيدروكلوريد ، ثم احتضن لإذابة MOGtag.

انقل البروتينات القابلة للذوبان إلى راتنج النيكل المشحون ، واخلطها واحتضانها مع الاهتزاز للسماح ل MOGtag بالارتباط بأيونات النيكل.

جهاز طرد مركزي لحبيبات MOGtag المقيد. قم بإزالة المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت للشطف ، واحتضانها بالرج.

يقوم Imidazole في المخزن المؤقت للشطف بإطلاق MOGtag من الراتنج.

جهاز الطرد المركزي مرة أخرى ، اجمع المادة الطافية المنقاة المحتوية على MOGtag ، وقم بتخزينها لمزيد من التحليل.

قم بتوزيع الثقافات بالتساوي بين زجاجات سعة 250 مليلتر متوافقة مع أجهزة الطرد المركزي عالية السرعة ، واحتفظ بالزجاجات على الجليد من هذه النقطة فصاعدا. حبيبات الخلايا البكتيرية عند 22,000 * جم ل