JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:15 د • June 17th, 2025
ابدأ بخلايا شوان أو SCs ، الخلايا الدبقية النخاعية للجهاز العصبي المحيطي ، المزروعة في الوسائط.
انقل الخلايا إلى طبق لوني مجهز بأقطاب كهربائية على كلا الجانبين.
ضع الطبق على مجال كهربائي نابض نانو ثانية أو جهاز nsPEF واضبط شدة المجال الكهربائي المطلوبة.
قم بتطبيق نبضات nsPEF عن طريق تدوير الأقطاب الكهربائية بعناية حتى تظهر الشرر.
مباشرة بعد التحفيز ، افصل الأقطاب الكهربائية واستمر في زراعة الخلايا.
يعطل nsPEF أغشية SC ، مما يخلق مسام نانوية عابرة تسمح بتدفق الكالسيوم. يتم إعادة إغلاق الأغشية في النهاية.
ينشط الكالسيوم داخل الخلايا البروتينات المرتبطة بالكالسيوم ، مما يؤدي إلى مسارات الإشارات التي تنظم الجينات المشاركة في تقدم دورة الخلية.
تعملإشارات الكالسيوم المستمرة أيضا على تنشيط عوامل النسخ التي تدفع إلى عدم تمايز SCs إلى نمط ظاهري للإصلاح ، يليه الانتشار.
بالإضافة إلى ذلك ، يزداد إفراز العوامل العصبية التي تدعم بقاء الخلايا العصبية ونموها.
النموذج جاهز الآن لدراسة دور SCs المحفزة nsPEF في تجديد الأعصاب الطرفية بعد الإصابة.
للبدء ، قم بإعادة تعليق خلايا RSC96 المزروعة في 1 مليلتر من وسط ثقافة DMEM ، وانقلها إلى أطباق لونية مع أقطاب كهربائية على كلا الجانبين. قم بتشغيل مفتاح الطاقة الخاص بالأداة ، وقم بتدوير المقبض لضبط شدة المجال الكهربائي. قم بتدوير الأقطاب الكهربائية بحذر حتى تظهر الشرر ، مما يسمح للخلايا بتلقي 5 نبضات من المجالات الكهربائية النبضية النانو ثانية وفقا لشدة شدة المجال المحددة مسبقا. افصل القطبين على الفور بعد العلاج.