تعداء العقد الجذرية الظهرية للفأر بوساطة التثقيب الكهربائي لتعزيز تجديد المحور العصبي الحسي

خذ فأرا مخدرا مع عقد جذر ظهرية مكشوفة L4 و L5 تحتوي على أجسام خلايا الخلايا العصبية الحسية.

قم بتحميل ماصة الحقن الدقيق بتركيبات الحمض النووي الريبي الموسومة بالفلوروفور والتي تنظم تجديد المحاور العصبي وصبغة التتبع.

حقن الخليط في DRGs.

باستخدام أقطاب التثقيب الكهربائي ، قم بتطبيق نبضات كهربائية على DRGs.

يؤدي هذا إلى تعطيل أغشية أجسام الخلايا العصبية الحسية ، مما يخلق مسام تسمح للتركيبات بدخول السيتوبلازم ، مما يسهل التعدين.

خياطة الشق والسماح للفأر بالتعافي.

بعد بضعة أيام ، أعد تخدير الماوس وتأمينه.

قم بعمل شق جانبي إلى خط الوسط على اليسار. تشريح العضلات لكشف العصب الوركي.

سحق العصب لإصابة محاور الخلايا العصبية الحسية. ضع علامة على الموقع بعقدة خياطة.

خياطة الشق والسماح للفأر بالتعافي.

تستهدف التركيبات المنقولة mRNAs في أجسام الخلايا العصبية الحسية DRG ، مما يعدل إنتاج البروتين بشكل عابر لتعزيز تجديد المحور الحسي بعد الإصابة.

لحقن DRG ، قم بتحميل بلازميدات الحمض النووي أو أوليغوس الحمض النووي الريبي في الماصة الشعرية الزجاجية. ثم أدخل طرف الماصة الزجاجية الشعرية بعناية في DRG. وحقن محلول 1 ميكرولتر تدريجيا من بلازميدات الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي oligos باستخدام نظام توزيع الحقن الدقيق داخل الخلايا.

للتثقيب الكهربائي ، اضغط على DRG المستهدف باستخدام الأقطاب الكهربائية برفق ، وقم بتطبيق نبضات كهربائية مربعة 5 مع نظام التثقيب الكهربائي. بعد ذلك ، أغلق العضلات ، ثم طبقات الجلد بخيوط النايلون. بعد يومين أو ثلاثة أيام من التثقيب الكهربائي DRG ، قم بتخدير الفأر داخل الصفاق ، وقم بلصق أطرافه على لوح الفلين ، وقم بعمل شق بطول 1 سم 0.5 سم على الجانب الأيسر على طول خط الوسط.

بعد ذلك ، قم بقطع العضلات ، مثل عضلات الألوية الكبيرة والعضلات الكمثري طوليا. ثم كشف جزء من العصب الوركي بين الثقبة الوركي الأكبر والشق الوركي. سحق العصب باستخدام ملقط الجراحة المجهرية لمدة 12 ثانية ، وقم بتمييز موقع السحق بخياطة نايلون لاينور. بعد ذلك ، أغلق طبقات العضلات والجلد بخياطة من النايلون.