القياس الكمي للأشواك المتغصنة باستخدام التصوير المجهري متحد البؤر

خذ الخلايا العصبية الهرمية التي يتم تحويلها وتصنيفها المناعي إلى اللون الأخضر الفلوري.

احصل على صور للخلايا العصبية باستخدام مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر مع ضبط الإعدادات لضمان جودة الصورة المثلى.

افتح صورة باستخدام برنامج متخصص واستخدم مرشح Gaussian لتقليل ضوضاء الخلفية.

قم بإجراء تتبع التغصنات شبه الأوتوماتيكي عن طريق تقدير قطر التغصنات أولا. بعد ذلك، حدد نقطة البداية والمسار ونقطة النهاية للتغصن.

للتجزئة التلقائية للعمود الفقري ، حدد إعادة بناء قطر التغصنات وقم بتعيين عتبة حجم التغصنات لتمثيل حجم التغصنات الفعلي.

حدد قيما لأصغر قطر رأس للعمود الفقري والحد الأقصى لطول العمود الفقري.

اضبط عتبة النقاط التي تمثل العمود الفقري ، وتأكد من توطينها على رؤوس العمود الفقري الفعلية.

قم بتعيين المعلمات لتصنيف العمود الفقري بناء على الطول وقطر الرأس والشكل.

قم بإنشاء نموذج ثلاثي الأبعاد للتغصنات مع العمود الفقري وتصدير البيانات لمزيد من التحليل.

تحت المجهر متحد البؤر ، حدد ما لا يقل عن 10 خلايا عصبية صحية لكل حالة مع مورفولوجيا هرمية وشجرة شجيرية كاملة. لتحديد 60 إلى 100 ميكرومتر لكل تغصنة ، احصل على صور ذات هدف زيت 40x و NA 1.3 وليزر 488 نانومتر مع طاقة ذروة نموذجية عند مستوى العينة حوالي 20 ميكرووات.

اضبط حجم البكسل على حوالي 80 نانومتر لأخذ عينات من العمود الفقري التغصني بشكل صحيح. لأخذ عي