توصيل الفيروسات داخل القراب في نموذج الفأر لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي

املأ حقنة بمحلول يحتوي على فيروسات مرتبطة بالغدة ، أو AAV ، والليدوكائين ، وهو مخدر موضعي.

ضع الفأر المستيقظ في وضع الانبطاح وقم بتغطية الجزء العلوي من جسمه.

أمسك حزام حوض الفأر واحلق أسفل ظهره لكشف الجلد. تعقيمه باليود والإيثانول.

حدد موقع الفجوة في أسفل العمود الفقري واضغط برفق لتمييزها.

قم بتدوير الذيل لمحاذاة العمود الفقري وإدخال المحقنة عموديا.

اضبط الزاوية حتى تحدث نفض الغبار في الذيل، لتأكيد دخول الإبرة إلى الفراغ داخل القراب حيث يتدفق السائل الدماغي النخاعي أو السائل النخاعي.

حقن المحلول ببطء للتوزيع المتساوي.

ترتبط الجسيمات الفيروسية بالخلايا العصبية ، وتدخل إلى الداخل ، وتطلق مادتها الوراثية في النواة ، مما يتيح التعبير الجيني المستهدف.

يحجب الليدوكائين الإشارات العصبية مؤقتا ، مما يتسبب في شلل الساق على المدى القصير ، مما يؤكد الولادة الناجحة في السائل الدماغي النخاعي.

يحدد هذا البروتوكول التوصيل داخل القراب كطريقة فعالة لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي.

قبل البدء في الإجراء ، قم بتوصيل إبرة قياس 27 بحقنة هاميلتون سعة 25 ميكرولتر وقم بمحاذاة الطرف المشطوف للإبرة مع المقياس الحجمي على المحقنة ، ثم قم بتحميل 8 ميكرولتر بعناية من 4 مرات 10 إلى نسخ الجينوم العاشرة من محلول الفيروس في المحقنة ، مع الحرص على تجنب الفقاعات.

بعد ذلك ، ضع فأرا مستيقظا يبلغ من العمر 30 إلى 70 يوما ، من 12 إلى 30 جراما على قطعة سرير في وضع الانبطاح في غطاء السلامة الحيوية وقم بتغطية الجزء العلوي من الجسم بشاش معقم لتهدئة الفأر وتجنب التعرض للعض. أمسك الفأر بإحكام على حزام الحوض ، مع إبهام على جانب واحد والسبابة والإصبع الأوسط على الجانب الآخر ، مع الحفاظ على الجلد بين مشدات الحوض الثنائية مشدودا بالإبهام والسبابة ، ثم حلق الفراء بين أحزمة الحوض الثنائية وتعقيم الجلد المكشوف بمقشر قائم على اليوديد و 70٪ إيثانول.

للتوصيل المباشر داخل القراب لمحلول الفيروس المرتبط بالغدة ، قم بجس الفراغ الفقري على طول خط الوسط بين مشدات الحوض الثنائية واستخدم ظفرك للضغط على فجوة في الجلد للإشارة إلى الفضاء الفقري L5 إلى L6. قم بتدوير قاعدة الذيل قليلا وبرفق للكشف عن خط الوسط للعمود الفقري وضبط شطبة الإبرة باتجاه رأس. مع تثبيت الماوس بإحكام في موضعه ، قم بمحاذاة الإبرة على طول خط الوسط للعمود الفقري وأدخل الإبرة برفق وعموديا في وسط المسافة البادئة ، مع الحفاظ على المحقنة في مستوى سهمي مركزي.

عندما تتلامس الإبرة مع العظم ، قلل الزاوية ببطء إلى حوالي 30 درجة وانزلق الإبرة في الفضاء الفقري. نفض الغبار المفاجئ للذيل هو علامة على الدخول الناجح إلى الفضاء داخل الجافية. عندما تدخل الإبرة إلى الفضاء الفقري ، سيشعر الطرف بتثبيته بإحكام. حقن المحلول الناقل والحفاظ على الإبرة داخل المساحة داخل الجافية لمدة دقيقة واحدة ، ثم اسحب الإبرة ببطء مع الدوران لتقليل التسرب.