موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:35 دقيقة • June 17th, 2025
ابدأ بثقافة ملتصقة للخلايا النجمية الأولية للفئران على غطاء داخل طبق ثقافة.
احتضن بمسبار الفلورسنت الحمضي الذي يعبر أغشية الخلايا السليمة لدخول الخلايا النجمية.
يتراكم المسبار بشكل انتقائي داخل الحويصلات الحمضية الداخلية ويضع ملصقات فلورية على الحويصلات لمراقبة نقلها.
يغسل لإزالة المسبار الزائد وإضافة وسط جديد.
ضع المزرعة تحت مجهر متحد البؤر وركز على خلية واحدة لإجراء التصوير بفاصل زمني.
تصور الشحنة المصنفة على أنها نقطة فلورية موزعة داخل المنطقة المحيطة بالنواة ،
العصارة الخلوية ، والعمليات النجمية.
التقط مستويات بؤرية متعددة على طول المحور Z لتصور البضائع في جميع أنحاء حجم الخلية ثلاثي الأبعاد.
قم بإجراء التصوير على فترات زمنية محددة لتتبع نقل البضائع داخل الخلايا على أعماق مختلفة داخل الخلايا النجمية.
تحليل حركة البضائع للتمييز بين البضائع الثابتة ، والبضائع التي تتحرك نحو محيط الخلية ، والبضائع التي تتحرك نحو النواة.
قبل 30 دقيقة من التصوير ، قم بتخفيف مسبار وضع العلامات الليزوزومي المناسب في 200 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا النجمية إلى تركيز عمل يبلغ 1 ميكرومولار ، وقم بتسمية الخلايا النجمية بالمسبار لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. ثم اغسل الخلايا مرة واحدة بوسط زراعة الخلايا النجمية الدافئ واستبدل الغسيل بوسيط التصوير.
مباشرة بعد وضع العلامات على المسبار ، ضع حاوية ثقافة الخلايا الن
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية