تصوير متحد البؤر ثلاثي الأبعاد عالي الدقة للحاجز الدموي الدماغي في قسم دماغ الفأر

ابدأ ببرنامج مجهر متحد البؤر وقم بتعيين معلمات الحصول على الصورة.

بعد ذلك ، خذ قسما لدماغ الفأر مثبتا على شريحة زجاجية. هذا القسم ملطخ بالأجسام المضادة التي تستهدف مكونات الحاجز الدموي الدماغي.

الحاجز الدموي الدماغي هو واجهة خلوية انتقائية بين مجرى الدم والدماغ للحفاظ على التوازن.

ضع قطرة من زيت الغمر مع معامل الانكسار المطلوب على الغطاء لتحسين الدقة وتقليل انكسار الضوء.

ضع الشريحة على مرحلة المجهر واستخدم مصباح التألق لتصور العينة.

باستخدام المرشحات المناسبة ، حدد موقع النوى الملطخة ب DAPI وحدد الجزء الشعري للتصوير.

ابدأ المسح المباشر واضبط المعلمات لكل قناة فلورسنت لالتقاط صور عالية الجودة.

أخيرا ، حدد نقاط البداية والنهاية لاكتساب Z-stack لإنشاء صورة ثلاثية الأبعاد للحاجز الدموي الدماغي.

في قائمة الاكتساب الخاصة بالبرنامج التي تتحكم في المجهر ، قم بتعيين معلمات الحصول على الصورة. في القائمة المنسدلة لحجم الصورة، حدد قيمة 1,024 × 1,024 بكسل. قم بتعديل حجم البكسل إلى قيمة تتراوح بين 200 و 300 نانومتر عن طريق ضبط قيمة قائمة Zoom.

في القائمة المنسدلة سرعة الاكتساب ، حدد قيمة 400 هرتز. بعد ذلك ، في قائمة إعدادات النظام ، حدد عمق البكسل ، وقم بتغيير القيمة إلى 12 بت. بعد ذلك ، في برنامج المجهر ، ضمن علامة التبويب Acquisition ، قم بالتبديل إلى خيار الحصول على الإطار المتسلسل. قم بتعيين سمك المقطع البصري على قيمة تتراوح بين 0.75 و 1 ميكرومتر لكل قناة، عن طريق تعديل القيمة في قائمة Pinhole.

أضف قطرة من زيت الغمر مع معامل انكسار 1.52 أعلى الغطاء ، مع قسم الدماغ لمطابقة معامل الانكسار للغطاء الزجاجي والهدف. بعد ذلك ، ضع العينة في المجهر ، وقم بتشغيل مصباح epifluorescent لتصور العينة باستخدام مناظير المجهر. بعد ذلك ، اضغط على الزر لبدء وضع المسح المباشر. أثناء المسح الضوئي ، اضبط الكسب وشدة الليزر لكل قناة لزيادة النطاق الديناميكي للصور وتجنب تشبع البكسل. بعد ذلك ، قم بإنشاء قسمي البداية والنهاية لأداء مداخن Z البصرية التي تمتد على الحجم الكامل للشعيرات الدموية ، واستخدم حجم خطوة يبلغ 0.45 ميكرومتر.

الأهم من ذلك ، يجب أن تظل جميع إعدادات الاستحواذ متطابقة أثناء جلسة التصوير.