الحقن تحت الشبكية للنواقل الفيروسية في ظهارة صبغة الشبكية في نموذج الفأر

ابدأ بفأر مخدر واستخدم عامل توسيع حدقة العين.

تحت المجهر ، افتح الجفن وبرز العين قليلا لكشف موقع الحقن.

ضع قطرة من محلول اللزجة المرنة للعيون ، ثم ضع غطاء لتصور شبكية العين.

باستخدام إبرة رفيعة ، قم بعمل ثقب خلف تقاطع القرنية والصلبة ، وتجنب تلف الأوعية الدموية والعدسة.

من خلال هذا الثقب المثقوب مسبقا ، أدخل حقنة حادة بشكل عرضي في الفضاء تحت الشبكية بالقرب من ظهارة صبغة الشبكية أو RPE ، والتي تدعم الخلايا العصبية في الشبكية.

حقن ناقل الفيروس العدسي الذي يحمل الجينات المستهدفة في الفضاء تحت الشبكية.

لاحظ تكوين فقاعة تحت الشبكية بسبب تراكم السوائل ، مما يؤكد التسليم الناجح للنواقل.

أغلق الجفن برفق لتغطية موقع الحقن والسماح للفأر بالتعافي.

يدخل الفيروس العدسي إلى RPE عن طريق الالتقام الخلوي ، ويطلق مادته الوراثية ، ويحولها إلى الحمض النووي المقابل ، والذي يتكامل مع الجينوم المضيف ، مما يتيح التعبير الجيني.

أولا ، قم بإعداد حقنة ميكرولتر بإبرة حادة عيار 33. قم بتعقيمه باستخدام غاز أكسيد الإيثيلين. بعد ذلك ، قم بإعداد تخفيف النواقل الفيروسية في PBS في أنبوب fuge صغير بحوالي 1 مليون وحدة عيار لكل ميكرولتر. الآن ، عند تحميل المحقنة ، قم بغسلها عدة مرات بالمحلول لإزالة أي مساحة ميتة في المحقنة. احصل على 1.5 إلى 2 ميكرولتر جاهزة للحقن.

مع تحضير حقن ناقل الفيروس ، قم بتخدير فأر بالغ بحقن داخل الصفاق من التيلامين والزولازيبام والزيلازين. تأكد من أن قد تم تخديره بسبب عدم وجود ردود أفعال. بمجرد تأكيد التخدير ، قم بتوسيع حدقة العين بانخفاض 0.5٪ فينيليفرين و 0.5٪ تروبيكاميد. الآن ، تحت مجهر التشغيل ، افتح الجفن وبرز العين لفضح خط الاستواء. أمسك العين في هذا الوضع عن طريق وضع أصابعك خارج الحافة المدارية.

بعد ذلك ، ضعي محلول لزج مرن للعين على سطح القرنية وضعي شريحة غطاء دائرية صغيرة فوق القرنية. وبالتالي ، يمكن رؤية شبكية العين. الآن ، خلف ليمفا قليلا ، وأدنى في العين اليمنى ، أو بشكل متفوق في العين اليسرى ، استخدم نصف إبرة معقمة قياس 30 لعمل ثقب صغير. الثقوب الموضوعة مؤقتا أو الموضوعة في الأنف ليست خيارات جيدة حيث يصعب تغطيتها.

أثناء الثقب ، لا تضرب الوعاء الداحي أو العدسة ، ولا تدخل شطبة الإبرة بالكامل.

بالنسبة للحقن تحت الشبكية ، أدخل إبرة حقن الناقل من خلال الفتحة بزاوية 45 درجة على مستوى القزحية. ادفع الإبرة للخلف باتجاه المنطقة المحيطة بالحليمة، باتباع المسار المحدد لعبور التجويف الزجاجي. اقترب من الإبرة في الفضاء تحت الشبكية حتى تشعر بمقاومة خفيفة ، مما يشير إلى أنه تم الوصول إلى طبقة RPE.

لا تخترق الأنسجة الصلبة بضغط مفرط لأنه يجب وضع الإبرة في الفضاء تحت الشبكية المحتمل. إذا ثقبت الإبرة أنسجة الجمجمة بقوة مفرطة ، فإنها تدخل إلى الفضاء المداري خارج العين دون مقاومة.

الآن ، قم بحقن الناقل الفيروسي برفق في الفضاء تحت الشبكية. حافظ على ثبات الإبرة لمنع تلف الأنسجة ، وهو أمر بالغ الأهمية. ثم اسحب الإبرة برفق. الآن ، يمكن تحرير مقلة العين. يجب أن يكون الفقاع تحت الشبكية الذي يدل على تراكم النواقل مرئيا. أخيرا ، أغلق الجفن برفق لتغطية موقع الحقن. سيحدث الختم الذاتي للثقب.