موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:13 دقيقة • August 7th, 2025
ابدأ بفأر مخدر واستخدم عامل توسيع حدقة العين.
تحت المجهر ، افتح الجفن وبرز العين قليلا لكشف موقع الحقن.
ضع قطرة من محلول اللزجة المرنة للعيون ، ثم ضع غطاء لتصور شبكية العين.
باستخدام إبرة رفيعة ، قم بعمل ثقب خلف تقاطع القرنية والصلبة ، وتجنب تلف الأوعية الدموية والعدسة.
من خلال هذا الثقب المثقوب مسبقا ، أدخل حقنة حادة بشكل عرضي في الفضاء تحت الشبكية بالقرب من ظهارة صبغة الشبكية أو RPE ، والتي تدعم الخلايا العصبية في الشبكية.
حقن ناقل الفيروس العدسي الذي يحمل الجينات المستهدفة في الفضاء تحت الشبكية.
لاحظ تكوين فقاعة تحت الشبكية بسبب تراكم السوائل ، مما يؤكد التسليم الناجح للنواقل.
أغلق الجفن برفق لتغطية موقع الحقن والسماح للفأر بالتعافي.
يدخل الفيروس العدسي إلى RPE عن طريق الالتقام الخلوي ، ويطلق مادته الوراثية ، ويحولها إلى الحمض النووي المقابل ، والذي يتكامل مع الجينوم المضيف ، مما يتيح التعبير الجيني.
أولا ، قم بإعداد حقنة ميكرولتر بإبرة حادة عيار 33. قم بتعقيمه باستخدام غاز أكسيد الإيثيلين. بعد ذلك ، قم بإعداد تخفيف النواقل الفيروسية في PBS في أنبوب fuge صغير بحوالي 1 مليون وحدة عيار لكل ميكرولتر. الآن ، عند تحميل المحقنة ، قم بغسلها عدة مرات بالمحلول لإزالة أي مساحة ميتة في المحقنة. احصل على 1.5 إلى 2 ميكرولتر جاهزة للحقن.
مع تحضير حقن ناقل الفيروس ، قم بتخدير فأر بالغ بحقن داخل الصفاق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية