تقنية التحليل الطيفي بالأشعة تحت الحمراء لتحويل فورييه لدراسة التجميع الذاتي للببتيد

يساعد التحليل الطيفي بالأشعة تحت الحمراء لتحويل فورييه - FTIR - على دراسة التجميع الذاتي للببتيد في هياكل فوق جزيئية مرتبطة ببعضها البعض بواسطة تفاعلات غير تساهمية.

ابدأ بأخذ عينة بروتين غير مجمعة — معلق من ببتيدات الأميلويد مع القدرة على تكوين بنية فوق جزيئية غنية بأوراق بيتا. ضع العينة في أداة FTIR مزودة ببلورة ATR.

قم بتوجيه شعاع الأشعة تحت الحمراء بزاوية حرجة على البلورة ؛ يمر الشعاع من خلاله ويضرب الواجهة بين البلورة والعينة. تتسبب البلورات ذات معامل الانكسار الأعلى من العينة في حدوث انعكاس داخلي للحزمة.

يمتد جزء صغير من الحزمة إلى العينة كموجة زائلة - موجة ثابتة عند نقاط الانعكاس. يؤدي تفاعل هذه الموجة مع العينة إلى امتصاص طاقة الموجة ، مما يؤدي إلى توهين الحزمة المنعكسة ، المسجلة بواسطة الكاشف.

اعتمادا على بنية الببتيد ، تمتص العينة في مناطق معينة من طيف الأشعة تحت الحمراء. يظهر طيف الامتصاص - الذي تم الحصول عليه عن طريق تحويل فورييه للإشارة - ذروة عريضة عند رقم موجي محدد ، وهو سمة من سمات عينة البروتين غير المجمعة.

احتضان العينة ، مما يسمح بالتجميع الذاتي ، لتشكيل ألياف أميلويد غنية بألواح بيتا. بعد الحضانة ، سجل طيف الامتصاص.

تشير

الذروة الحادة عند رقم موجة مختلف عن الذروة العريضة السابقة إلى التحول إلى مجموعة صفائح بيتا.

لتحضير محلول ذاتي التجميع ، قم بإذابة 1 ملليغرام من مسحوق الببتيد المجفف بالتجميد في خليط من 20٪ أسيتونيتريل و 10 ملليمولار HEPES في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر. ثم قم بتدوير محلول التجميع واترك العينة لتجميعها في درجة حرارة الغرفة.

عندما تصل مجموعة الببتيد إلى مرحلة النضج ، قم بتجفيف 8 إلى 10 ميكرولتر من محلول التجميع كغشاء رقيق على بلورة الماس ذات الانعكاس الكلي المخفف ، ومراقبة اختفاء ذروة مياه كبيرة وواسعة من 1,640 إلى 1,630 سنتيمترا عكسيا كما يتشكل الفيلم الجاف.

احصل على أطياف الخلفية والأشعة تحت الحمراء من 1,500 إلى 1,800 سنتيمتر عكسي ، بمتوسط 50 عملية مسح بدقة 2 سنتيمتر عكسي ، مع طرح عمليات المسح في الخلفية قبل كل مسح عينة.

يجب ملاحظة توقيع الأشعة تحت الحمراء لتجميع صفائح بيتا كذروة حادة بين 1,625 و 1,635 سنتيمترا عكسيا.