تصوير حالة الأكسدة والاختزال في الخلايا العصبية الأولية باستخدام مؤشر القياس النسبي

خذ غطاء مع الخلايا العصبية الأولية المعدلة وراثيا في غرفة تصوير مملوءة بمخزن مؤقت للتصوير.

تعبر هذه الخلايا عن مؤشر الأكسدة والاختزال القائم على البروتين الفلوري في مصفوفة الميتوكوندريا.

ضع الغرفة تحت المجهر الفلوري ، وحدد الخلايا تحت الضوء المرئي ، ثم انتقل إلى التصوير الفلوري.

قم بتطبيق طولين موجيين للإثارة لتحفيز المؤشر وقياس انبعاث التألق.

تعكس نسبة شدة التألق عند هذه الأطوال الموجية حالة أكسدة الميتوكوندريا.

إدخال NMDA لتنشيط مستقبلات NMDA الخلوية ، مما يتسبب في تدفق الكالسيوم داخل الخلايا.

تؤدي الزيادة إلى امتصاص الكالسيوم في الميتوكوندريا ، مما يؤدي إلى إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية وأكسدة الميتوكوندريا

.

يقوم

ROS بأكسدة المؤشر ، وتغيير تألقه وزيادة نسبة الإشارة.

أدخل عوامل مؤكسدة لأكسدة المؤشر بالكامل ، مما يزيد من نسبة الإشارة.

قم بإزالة المخزن المؤقت ، ثم أدخل عوامل الاختزال لتقليل الصبغة تماما ، مما يقلل من نسبة الإشارة.

استخدم نسب الإشارة القصوى والدنيا لمعايرة وقياس أكسدة الميتوكوندريا التي يسببها NMDA.

للتصوير المباشر، اضبط الفاصل الزمني للفاصل الزمني على 30 ثانية والمدة على 25 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتركيب الخلايا ، وضع الغرفة على المجهر ، وركز الخلايا كما هو موضح سابقا. قم بالتبديل إلى وضع المسح الضوئي واستخدم قناة 488 نانومتر في المنظر المباشر للتركيز على الخلايا وتحديد موقعها