الحقن المجهري لدماغ القوارض باستخدام إبرة كوارتز دقيقة

خذ إبرة كوارتز صغيرة ذات ثقوب مخصصة ، متصلة بحقنة مملوءة بالماء ، ومتصلة بمضخة صغيرة للتحكم في معدل التسليم.

خذ فأرا آمنا ومخدرا مع موقع الحقن المكشوف.

ضع الإبرة الدقيقة وضع طبقة البارافين تحتها. ضع قطرة من محلول الحقن عليه.

اسحب الماء لإنشاء فقاعة هواء ، ثم اخفض الإبرة الدقيقة لسحب المحلول.

اسمح لقطرة بالتشكل ، مما يضمن مرورا واضحا.

استخدم إبرة حادة لثقب غشاء الدماغ.

أدخل الإبرة الدقيقة أثناء ضبطها على سرعة توصيل منخفضة لمنع تغلغل شظايا الأنسجة في الإبرة.

بمجرد وضعه ، اذهب أعمق قليلا. أوقف التسليم وارفعه مرة أخرى لتجنب التدفق العكسي.

ابدأ التسليم بسرعة متزايدة. تضمن الثقوب الموجودة في الإبرة التوزيع الأمثل للمحلول المحقون.

اترك وقتا كافيا قبل سحب الإبرة لتسهيل الانتشار.

قطع قطعة صغيرة من فيلم البارافين البلاستيكي ووضعها على الجمجمة. باستخدام الماصة سعة 10 ميكرولتر ، قم بعمل قطرة من المحلول لتطبيقها على فيلم البارافين البلاستيكي. أوقف المضخة. استرجع قليلا دافع المضخة ، وقم بإنشاء فقاعة هواء صغيرة في الشعيرات الدموية عن طريق سحب مكبس حقنة الحقن المجهرية برفق.

اخفض طرف الإبرة حتى تصل إلى القطرة. ارسم العينة عن طريق سحب مكبس حقنة الحقن المجهري ببطء شديد ، وتجنب أي تكوين فقاعة. استبدل دافع المضخة الملامس للمكبس ، وقم بتشغيل المضخة بمعدل تدفق 0.3 ميكرولتر في الدقيقة.

ثم انتظر حتى يتم تشكيل قطرة قبل الانتقال إلى الخطوة التالية. بعد ذلك ، اخفض التدفق إلى 0.1 ميكرولتر في الدقيقة. الجافية بإبرة مخروطية من الفولاذ المقاوم للصدأ وخفض الإبرة ببطء للدخول إلى أنسجة المخ. عند الوصول إلى الموضع المطلوب ، انزل 0.1 ملم إضافي ، ثم أوقف المضخة.

ارفع الذراع المجسمة بمقدار 0.1 ملم ، وابدأ تشغيل المضخة مرة أخرى بسرعة 0.3 ميكرولتر في الدقيقة. بعد ذلك ، ابدأ المؤقت والحقن. راقب حركة الفقاعة أثناء الحقن. في النهاية ، أوقف المضخة وانتظر خمس دقائق قبل استرداد الإبرة ببطء.