التصوير ثلاثي الأبعاد للخلايا النجمية ذات العلامات المناعية باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

خذ قسما من دماغ الفأر الملطخ بالمناعة مع الخلايا النجمية المصنفة بالفلورسنت. يتألق سيتوبلازم الخلية النجمية باللون الأحمر ، بينما تتألق النواة باللون الأزرق.

ضع الشريحة على مسرح المجهر متحد البؤر تحت عدسة موضوعية مناسبة.

باستخدام برنامج الاستحواذ ، اضبط التركيز وحدد الفلوروفورات التي تضع علامة على سيتوبلازم الخلية النجمية والنواة.

ابدأ التصوير المباشر وحسن معلمات التصوير لتقليل التشويش في الصورة المكتسبة.

ضمن معلمات الاكتساب ، حدد وضع مسح ضوئي منخفض السرعة لالتقاط صورة ثنائية الأبعاد عالية الجودة.

حدد الموضع العلوي للخلية النجمية كنقطة بداية للمكدس Z وأدنى موضع كنقطة نهاية.

حدد عدد الشرائح التي تغطي عمق الخلية الكامل.

ادمج الشرائح لإنشاء صورة ثلاثية الأبعاد للخلية النجمية.

لبدء الفحص المجهري متحد البؤر ، ضع شريحة على مرحلة المجهر وحدد هدف 63x. بعد فتح برنامج الاستحواذ ، انقر فوق الإعداد الذكي في علامة التبويب Acquisition وحدد الفلوروفورات المناسبة. هنا ، يتم استخدام DAPI و Alexa Fluor 555.

بعد ذلك ، انقر فوق أفضل إشارة ، متبوعا بتطبيق. ثم انقر فوق تعيين التعرض للسماح للكمبيوتر بتحديد معلمات التعريض الضوئي المثلى.

لتحسين الصورة ، افتح نافذة القنوات وقم بتبديل الصورة إلى مباشر. اضبط التركيز إذا لزم الأمر. ثم انقر فوق 1 AU لتحسين الثقب. اضبط الكسب للحصول على أفضل كثافة.

أخيرا ، قم بتعيين الكسب الرقمي بين 2 و 3. بعد هذا التحسين ، أوقف الصورة الحية وافتح نافذة وضع الاكتساب. اضبط حجم الإطار بالنقر فوق X by Y ، وحدد 1024 × 1024. أيضا ، اختر سرعة بطيئة.

بعد ذلك ، افتح علامة التبويب متوسط المؤشرات وحدد رقما أكبر من أو يساوي 4. ثم انقر فوق الزر "Snap" واحفظ الصورة ثنائية الأبعاد الملتقطة. لإعداد التصوير ثلاثي الأبعاد، افتح علامة التبويب الإعداد الذكي وحدد عنصر Z-Stack، مما سيؤدي إلى فتح نافذة المكدس.

لتعيين الموضعين الأول والأخير ل Z-Stack ، مرة أخرى ، انقر فوق Live واضبط التركيز على الموضع العلوي للخلية النجمية. انقر فوق تعيين أولا. الآن اضبط التركيز على أدنى موضع للخلية النجمية وانقر فوق تعيين الأخير. ثم أوقف العرض المباشر.

بعد ذلك ، اختر الفاصل الزمني بالنقر فوق الأمثل لتعيين عدد الشرائح. هنا، الفاصل الزمني هو 1.01 ميكرومتر. أخيرا ، انقر فوق بدء التجربة واحفظ الصور بمجرد اكتمال الفحص.