توصيل siRNA المستهدف إلى الخلايا العصبية لإسكات بروتين البريون باستخدام المجمعات الشحمية
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:57 دقيقة • June 18th, 2025
ابدأ بالحمض النووي الريبي الصغير المتداخل الذي يثبط تعبير بروتين البريون ، وهو بروتين مرتبط بأمراض البريون التنكسية العصبية.
أضف تعليق الجسيم الشحمي الكاتيوني.
يرتبط siRNA سالب الشحنة بسطح الجسيم الشحمي موجب الشحنة.
قدم ببتيد RVG-9r ، وهو بروتين سكري لفيروس داء متصل بذيل بولي أرجينين.
تسهل بقايا الأرجينين ربط RVG-9r-siRNA.
حقن مجمعات الببتيد الشحمية siRNA في وريد ذيل الفأر المخدر.
تنتشر LSPCs عبر مجرى الدم وتصل إلى الدماغ.
يرتبط ببتيد RVG-9r بمستقبلات أستيل كولين النيكوتين على الخلايا البطانية ، مما يؤدي إلى انتقال التخلي بوساطة المستقبلات عبر الحاجز الدموي الدماغي.
داخل الدماغ ، يرتبط RVG-9r بمستقبلات الأستيل كولين العصبية ، مما يسهل الالتقام الخلوي LSPC وإطلاق الحمض النووي الريبي.
يرتبط مركب الإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي ب siRNA.
ينفصل خيط الراكب ، بينما يرتبط خيط التوجيه ب PrP mRNA ويشققه ، مما يمنع الترجمة ويقلل من تعبير PrP.
أضف 20 ميكرولترا من معلق الجسيمات الشحمية النانوية 4 نانومول إلى 200 ميكرولتر من محلول siRNA 20 ميكرومولار ، واحتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم أضف 80 ميكرولترا من مخزون 500 ميكرومولار من RVG-9r الذي يستهدف الببتيد إلى محلول الجسيم الشحمي siRNA ، واحتضانه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
بعد تخدير الفأر باستخدام 2 إلى 3٪ من الأيزوفلوران في الأك
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية