موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:57 دقيقة • June 18th, 2025
ابدأ بالحمض النووي الريبي الصغير المتداخل الذي يثبط تعبير بروتين البريون ، وهو بروتين مرتبط بأمراض البريون التنكسية العصبية.
أضف تعليق الجسيم الشحمي الكاتيوني.
يرتبط siRNA سالب الشحنة بسطح الجسيم الشحمي موجب الشحنة.
قدم ببتيد RVG-9r ، وهو بروتين سكري لفيروس داء متصل بذيل بولي أرجينين.
تسهل بقايا الأرجينين ربط RVG-9r-siRNA.
حقن مجمعات الببتيد الشحمية siRNA في وريد ذيل الفأر المخدر.
تنتشر LSPCs عبر مجرى الدم وتصل إلى الدماغ.
يرتبط ببتيد RVG-9r بمستقبلات أستيل كولين النيكوتين على الخلايا البطانية ، مما يؤدي إلى انتقال التخلي بوساطة المستقبلات عبر الحاجز الدموي الدماغي.
داخل الدماغ ، يرتبط RVG-9r بمستقبلات الأستيل كولين العصبية ، مما يسهل الالتقام الخلوي LSPC وإطلاق الحمض النووي الريبي.
يرتبط مركب الإسكات الناجم عن الحمض النووي الريبي ب siRNA.
ينفصل خيط الراكب ، بينما يرتبط خيط التوجيه ب PrP mRNA ويشققه ، مما يمنع الترجمة ويقلل من تعبير PrP.
أضف 20 ميكرولترا من معلق الجسيمات الشحمية النانوية 4 نانومول إلى 200 ميكرولتر من محلول siRNA 20 ميكرومولار ، واحتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم أضف 80 ميكرولترا من مخزون 500 ميكرومولار من RVG-9r الذي يستهدف الببتيد إلى محلول الجسيم الشحمي siRNA ، واحتضانه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
بعد تخدير الفأر باستخدام 2 إلى 3٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين ، قم بتغطية عيون الفأر بمرهم للعيون وتأكد من التخدير عن طريق إجراء قرصة إصبع القدم. تابع فقط في حالة غياب التفاعل. أثناء الحفاظ على التخدير ، ضع الفأر على ظهره أو جانبه للوصول إلى وريد الذيل.
امسح الذيل بنسبة 70٪ من الإيثانول ، ثم استخدم حقنة الأنسولين عيار 26 لحقن 300 ميكرولتر من LSPCs أو PALETS في الوريد الذيل. ابدأ بالحقن بعيدا وتحرك بالقرب من الوريد إذا انهار الوريد أو تمزق. ضع الماوس في قفص نظيف حتى يحافظ على الرق القصي.